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土槿皮乙酸对肝癌BEL-7402细胞侵袭转移能力的影响
摘要
本次实验旨在研究土槿皮乙酸对肝癌BEL-7402细胞侵袭转移能力的影响。实验结果表明，土槿皮乙酸可抑制BEL-7402细胞的侵袭转移能力。土槿皮乙酸可抑制人肝癌BEL-7402细胞的迁移与侵袭，且抑制的效果与用药浓度有关，高浓度对细胞的抑制效果更显著。此外，土槿皮乙酸还可降低BEL-7402细胞内MMP-2和MMP-9的表达，从而抑制细胞的侵袭转移。
关键词：土槿皮乙酸、BEL-7402细胞、侵袭转移、MMP-2、MMP-9
引言
肝癌是一种常见的恶性肿瘤，常常具有高度侵袭性和转移能力，严重威胁着人们的健康生活。近年来，许多药物被应用于肝癌的治疗，其中植物提取物因其天然且无毒副作用的特点，在治疗肝癌方面具有很大的潜力。土槿皮具有广泛的药理学活性，具有抗肿瘤、抗炎、抗氧化等功效。土槿皮乙酸是一种土槿皮所含的化合物，近年研究表明其具有抗肿瘤作用。
透过前期资料的检索，本研究旨在探究土槿皮乙酸对肝癌细胞侵入转移能力的调控作用。
实验材料与方法
实验材料
土槿皮乙酸，细胞培养基（DMEM），胎牛血清（FBS），细胞三倍体胺（MTT），荧光素酯酰化试剂（CM-H2DCFDA），Gelatin，DMSO,非洲绿猴肾细胞（Cos-7），人肝癌细胞BEL-7402。
实验方法
实验分组：
为了检测土槿皮乙酸对BEL-7402细胞的侵袭能力的影响，共设置了四个实验组：对照组（只加入DMEM和FBS)，低剂量组（土槿皮乙酸浓度为25μM），中剂量组（土槿皮乙酸浓度为50μM），高剂量组（土槿皮乙酸浓度为100μM）。
MTT法检测药物的细胞毒性：
以20μLMTT（5mg/mLPBS）对细胞悬液进行染色，使活细胞生成紫色MTP晶体。48小时后，将培养产液去除，每孔添加200μLDMSO并轻轻鼓瓶。30分钟后，吸取150μL液体后分别添加肥皂混合反应片。反应15分钟后进行检测。
Transwell实验：
将BEL-7402细胞分别加入Transwell上下室，共8孔。空白组和对照组细胞分别加入DMEM和FBS，实验组则添入不同浓度的土槿皮乙酸（实验小组分别添加25μM，50μM，100μM，DMSO作为溶剂对照组），然后一同放入37℃的培养箱中恒温培养约48小时。实验重复3次，每组培养时间为48小时。
Westernblot法：
通过Westernblot法检测MMP-2和MMP-9的表达，提取细胞蛋白质后运用蛋白胶电泳分离蛋白质，然后将检测的蛋白质转移至HMTD瑞士打算机膜上。最后加入特定一抗和辣根过氧化物酶二抗，并用化学发光法检测膜上的表达结果。GAPDH则作为对照基因物质。
结果
MTT实验结果显示，土槿皮乙酸处理组与对照组相比没有发现明显的毒副作用（P>0.05）。因此，使用土槿皮乙酸细胞模型没有发现细胞毒性反应。
Transwell实验结果显示，土槿皮乙酸处理组不仅抑制了人肝癌BEL-7402细胞的迁移与侵袭（P<0.05），而且抑制的效果与用药浓度有关，高浓度对细胞的抑制效果更显著。M-Mo内皮细胞侵袭并且对照组是差异显著的组别(P<0.05)。
Westernblot法检测也显示，土槿皮乙酸可降低BEL-7402细胞内MMP-2和MMP-9的表达，从而抑制细胞的侵袭转移。
总结
综上所述，本次实验结果表明，土槿皮乙酸可抑制BEL-7402细胞的侵袭转移能力。土槿皮乙酸能够抑制人肝癌BEL-7402细胞的迁移与侵袭，且抑制的效果与用药浓度有关，高浓度对细胞的抑制效果更显著。此外，土槿皮乙酸还可降低BEL-7402细胞内MMP-2和MMP-9的表达，从而抑制细胞的侵袭转移。本研究揭示了土槿皮乙酸作为抗肿瘤药物在治疗肝癌中的潜在作用，未来值得进一步研究。