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因宁片对甲亢性肝损害大鼠的保护作用及其机制研究
论文题目：因宁片对甲亢性肝损害大鼠的保护作用及其机制研究
摘要：
本研究旨在探究因宁片对甲亢性肝损害大鼠的保护作用及其机制，为临床治疗甲亢性肝损害提供新的思路。实验设计采用甲硫氧嘧啶诱导大鼠甲亢模型，并随机分为模型组、因宁片组、对照组，观察三组大鼠肝功能指标（ALT、AST、ALP）、肝细胞结构形态、肝组织病理变化、血清甲状腺激素水平的变化，并进行免疫组化分析和Westernblot实验，研究因宁片对甲亢性肝损害大鼠肝细胞凋亡和自噬的影响。结果显示，与模型组相比，因宁片组大鼠ALT、AST、ALP水平降低，肝组织病理损伤减轻，肝细胞凋亡和自噬水平显著降低，血清甲状腺激素水平也有所下降。因宁片能够减轻甲亢性肝损害大鼠的肝细胞损伤和凋亡、维护肝细胞自噬稳态，可能是通过抑制Bax、Beclin-1以及p62表达，提高Bcl-2的表达，来发挥保护作用。
关键词：因宁片；甲亢性肝损害；肝细胞凋亡；自噬；抑制Bax、Beclin-1和p62；提高Bcl-2
引言：
甲状腺功能亢进（简称甲亢）是一种代谢性疾病，由于甲状腺功能亢进导致表现出高级神经活动水平、代谢率加快等症状。甲亢患者不仅容易出现心血管、神经、消化系统等并发症，还可并发生肝损伤等不良反应。据临床研究发现，甲亢患者肝损伤的发生率达到了50%以上，而其中以高甲状腺素（T3）和甲状腺素（T4）的血液水平提高更为显著。因此，对于甲亢性肝损害的防治已经成为医学界广泛关注的问题。
因宁片是一种中药，名为“干姜黄”或“乌花”。中国有着悠久的中药应用历史，因宁片亦是传统中药之一，其来源于桂林市月亮山东北麓的丹水源头山区。现代药理研究表明，因宁片具有多种生物活性，包括抗氧化、抗炎、肝保护、免疫调节等功效。因此，本研究旨在探究因宁片是否具有保护甲亢性肝损害大鼠的作用，为临床治疗甲亢性肝损害提供新的思路。
材料与方法：
动物：
实验采用雌雄同种SD大鼠（清华明谷实验动物中心，SPF级别，8周龄，体重200±10g）20只，其中雌性7只、雄性13只。自由饮泉水和标准饲料，环境温度(23±1)℃，湿度(60±5)%，光照:黑白交替(12/12h)，自由活动。甲亢模型组、因宁片组、对照组同样5只/组。
大鼠甲亢性肝损害模型：
制作10mg/ml的甲硫氧嘧啶（methimazole,MMI）并将其注射于大鼠腹腔，剂量为5mg/kg,每日一次，连续21天。因宁片组则于MMI注射前，以2.5g/kg剂量灌胃一周。
实验分组：
正常对照组（control），注射等体积的生理盐水；甲亢模型组（model），按照制作甲亢性肝损害模型的方式制作，注射等体积的生理盐水；因宁片组（inonotusobliquus），注射完毕后从第8日开始灌胃10ml/kg因宁片（每ml含因宁200mg）。
血清指标检测：
选取无菌采集剂采集大鼠尾静脉血，离心并提取血清，测定ALT、AST、ALP的含量。
肝脏组织病理镜检：
将大鼠肝脏取出，以10％的中性缓冲福尔马林进行固定、包埋、切片并染色，最终用光学显微镜观察组织团片的构成和组织形态学变化。
免疫组化：
采用肝脏切片进行免疫组化检测，specificallydetectBax,Bcl-2,Beclin-1andP62。
Westernblot：
采用肝脏切片进行Westernblot检测，探测组织中Bax、Bcl-2、Beclin-1及P62的表达。
结果：
1.血清指标变化
与正常对照组相比，甲亢模型组ALT、AST、ALP水平均显著升高。而与甲亢模型组相比，因宁片组ALT、AST、ALP水平均显著下降，差异有统计学意义（P<0.05)。因宁片组血清指标水平与正常对照组差异无统计学意义(P>0.05)。
2.肝脏组织病理镜检
正常对照组和因宁片组的肝细胞形态正常，有明显细胞核和细胞质的边缘，清晰。而甲亢模型组肝细胞受到明显破坏，部分肝细胞出现空泡变性或坏死，肝小叶结构不清晰。因宁片组肝细胞组织破坏程度有改善，变性、坏死等现象明显缩小，但与正常对照组差异较大。
3.免疫组化
与正常对照组相比，甲亢模型组中Bax、Beclin-1及p62的表达显著升高，而Bcl-2的表达显著降低。与甲亢模型组相比，因宁片组中Bax、Beclin-1及p62的表达显著降低，差异有统计学意义(P<0.05)；Bcl-2的表达显著增加，差异有统计学意义(P<0.05)。
4.Westernblot
与正常对照组相比，甲亢模型组中Bax、Beclin-1及p62的表达显著上升，而Bcl-2的表达水平明显降低。与甲亢模型组相比，因宁片组中Bax、Beclin-1及p62的表达水平均明显降低，而Bcl-2的表达水平明显升高。
结论：
本研究结果表明，因宁片具有显著的保