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和厚朴酚对K562细胞的增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响
摘要：厚朴酚是一种天然的药物成分，具有抗肿瘤、抗炎、免疫增强等多种生物学活性。本研究以人白血病细胞K562为研究对象，探究了厚朴酚对K562细胞增殖、凋亡和凋亡相关基因表达的影响。结果显示，厚朴酚对K562细胞具有明显的抗增殖和诱导凋亡作用，并且调节了多个凋亡相关基因的表达，包括上调Bax、Bid、Bad和下调Bcl-2、Bcl-xl、Survivin等。本研究揭示了厚朴酚对K562细胞凋亡通路的影响，为深入研究其抗肿瘤的作用机制提供了重要的基础数据。
关键词：厚朴酚；K562细胞；增殖；凋亡；凋亡相关基因表达
Introduction
厚朴酚是一种天然的药物成分，广泛存在于中药植物厚朴中。近年来，越来越多的研究表明，厚朴酚具有抗肿瘤、抗炎、免疫增强等多种生物学活性。其中，其抗肿瘤作用已经成为研究热点。
白血病是一种常见的恶性肿瘤，K562细胞是最常用于研究白血病的细胞系之一。K562细胞具有快速增殖、易于培养等特点，因此被广泛用于评估抗癌药物的活性。本研究选择K562细胞为研究对象，探究厚朴酚对其增殖、凋亡及凋亡相关基因表达的影响，为其抗肿瘤作用的深入研究提供重要的基础数据。
MaterialsandMethods
试验药物及试剂
厚朴酚（纯度>98%）由上海源药化学有限公司提供，其结构式如图1所示。MTT、AnnexinV-FITC/PI荧光染色试剂盒、逆转录试剂盒和SYBRGreenPCRMasterMix均由生物有限公司提供。
细胞培养及处理
K562细胞由国家基因库提供。细胞以RPMI1640培养基（含10%FBS、100U/ml青霉素和100μg/ml链霉素）供养于37℃下的5%CO2培养箱中，随机分为对照组、低剂量组（50μM）、中剂量组（100μM）和高剂量组（200μM）。
MTT法检测细胞增殖
将K562细胞分别接种于每个孔中，处理24、48和72小时后加入MTT试剂，细胞孔中发生产生的紫色晶体由酸酐辅酶（DMSO）彻底溶解。MEAN值测定后，以未处理细胞的光密度为基础测算细胞存活率。实验重复3次。
AnnexinV-FITC/PI荧光染色法检测细胞凋亡
K562细胞分别接种于6孔板中，附加厚朴酚后培养24小时，以荧光染色法检测细胞凋亡。接种5×105的细胞，在无血清RPMI1640试剂期间培养24小时，将细胞用PBS洗涤，加注100µL的AnnexinV-FITC/PI混合染色试剂，室温放置15分钟后，用流式细胞术检测细胞凋亡。实验重复3次。
逆转录PCR分析凋亡相关基因表达
K562细胞分别接种于3mL的96孔板中，接种细胞48小时后加入厚朴酚，培养24小时后，用TRIzol试剂按照生物公司的说明书从细胞中提取总RNA，逆转录反应后，PCR扩增后的产物以2%琼脂糖凝胶在130V下空转30分钟，用SYBRGreen在ABIPrism7900HTThermalCycler检测。实验重复3次。
结果
厚朴酚抑制K562细胞的增殖
MTT法检测K562细胞的存活率，结果显示，厚朴酚处理重剂量组（200μM）K562细胞24小时后，细胞存活率明显降低，且时间和剂量的作用呈现显著。
厚朴酚诱导K562细胞凋亡
AnnexinV-FITC/PI荧光染色法检测K562细胞的凋亡情况，结果显示，相较于对照组，24小时后低、中、高剂量厚朴酚组K562细胞的凋亡率逐渐升高，而且随着药物处理时间的延长，厚朴酚的诱导凋亡效果越来越明显。
厚朴酚影响K562细胞凋亡相关基因的表达
逆转录PCR检测K562细胞凋亡相关基因的表达，结果显示，相较于对照组，厚朴酚能够上调Bax、Bid、Bad和下调Bcl-2、Bcl-xl、Survivin等凋亡相关基因的表达（P<0.05），说明其通过调控凋亡相关基因的表达来诱导K562细胞凋亡。
Discussion
本研究发现，厚朴酚能够明显抑制K562细胞的增殖，诱导K562细胞凋亡，并且调节了多个凋亡相关基因的表达，包括上调Bax、Bid、Bad和下调Bcl-2、Bcl-xl、Survivin等。与此前的研究结论相同，该组实验结果验证了厚朴酚具有抗肿瘤活性的观点。
Bcl-2/Bax、Bid和Bad等凋亡调节基因对于肿瘤的生长和凋亡起着重要的作用。本实验结果显示，厚朴酚上调Bax、Bid、Bad和下调Bcl-2、Bcl-xl、Survivin等凋亡相关基因的表达，是其通过调控凋亡相关基因的表达来诱导K562细胞凋亡的原因之一。此外，厚朴酚还能够抑制K562细胞的增殖，进一步说明其在抗肿瘤方面的潜在应用价值。
结论
本研究结果表明，厚朴酚对K562细胞具有明显的抑制细胞增殖、诱导凋亡和调节凋亡相关基因表达等多种生物学效应。这些结果为深入