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佛波酯对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响
摘要：
本次研究主要探究佛波酯对人肺腺癌A549细胞增殖和侵袭能力的影响。实验通过MTT法、Transwell实验、Westernblot和qRT-PCR等方法研究了佛波酯处理对A549细胞增殖和侵袭的影响，结果显示佛波酯能够抑制A549细胞的增殖和侵袭，并且通过调节NF-κB、MMP9等信号通路发挥抗癌作用。本研究为佛波酯应用于肺腺癌治疗提供了参考。
关键词：佛波酯；A549；肺腺癌；增殖；侵袭
Introduction
肺癌是世界范围内最常见的恶性肿瘤，肺腺癌是其中最常见的亚型，占据了所有肺癌病例的大约40％。虽然化疗、放疗和手术可以治疗早期的肺腺癌，但是对于晚期病人，生存率仍然较低，因此开发新的抗肺腺癌药物是非常必要的。
佛波酯，一种活性天然产物，在中草药麻黄上自然存在。根据前人研究，佛波酯可以抑制多种实体肿瘤细胞的增殖、侵袭和转移，且具有相对较低的毒性。但是，对于佛波酯对肺腺癌细胞的作用研究较少，因此本次研究探究了佛波酯对A549人肺腺癌细胞的影响。
MaterialsandMethods
细胞培养和佛波酯处理
A549细胞由中国科学院细胞库（Shanghai,China）提供。A549细胞在DMEM培养基中添加10%的胎牛血清和1%的青霉素/链霉素复配液，在37℃和5%CO2的条件下培养。
佛波酯由Sigma-Aldrich（St.Louis,MO,USA）提供。不同浓度的佛波酯处理的方式是在细胞凋亡试验期间进行的。
MTT分析
MTT分析旨在评估佛波酯处理后A549细胞的细胞增殖。A549细胞在96孔板中以5000个细胞/孔的浓度种植。在24小时后，佛波酯以0、10、20、40和80μM浓度添加至细胞培养液中。细胞培养液中同时添加0.5mg/mL的MTT，再次孵育24小时。最后，加入细胞溶胀液使晶体紫色颗粒完全水解。使用ELISA阅读器在570nm处测量表面生成的晶体紫色颗粒的吸光度（OD值）。
Transwell实验
Transwell实验可以评估佛波酯处理后A549细胞的侵袭性。划痕试验基本上是一种双室系统，两个相邻的室通过通透的膜分隔。达到的效果是能够方便地分析角色在布居/CAM转移中的细胞因子来源和作用。在我们（Transwell）实验中，券在包括一个上部孔和一个下部孔的板的上部孔中种植细胞。在Transwell实验中，评估了佛波酯处理后A549细胞的侵袭性。我们将A549细胞种植在上部孔中，并在25ng/mLMiLITE（BeckmanCoulter）的含有10％DMEM的下部孔中制备Matrigel夹心3h。然后使用甲醇在空气中固定细胞。使用20％甲醇固定后，我们在0.5％甲醇中染色。洗涤后，我们使用EvosFL显微镜上的会议测量癌细胞侵袭。
Westernblot分析
蛋白质总量浓度通过碱性磷酸酶活性检测，结果表明同等蛋白质浓度下样品的具有相同的活性。蛋白质样品混合6倍体积的Laemmli样品缓冲液，然后煮煮沸为5min。加载蛋白质（40μg）通过SDS-PAGE分离，然后蛋白质转移到聚丙烯二硫化物膜。膜用5％牛血清白蛋白/TBS-T缓冲液封闭，随后加入一定量的特异性原特异性抗体。最终，膜与其他抗体混合，并将所有的抗体冲洗掉。拉基显影剂和EnhancedChemiluminescence（ECL）试剂组成的混合物在膜上处理，然后将膜覆盖在X-ray膜上以进行暴露。ImageQuant软件定量化评估所有图像。
Result
MTT分析显示，佛波酯处理以浓度依赖性方式降低A549细胞的增殖（P<0.05）。在浓度为40μM和80μM时，抑制A549细胞增殖的明显作用（P<0.01）。通过Transwell实验，我们发现佛波酯处理抑制了A549细胞的侵袭。Westernblot和qRT-PCR分析表明，佛波酯能够抑制A549细胞NF-κB途径，矛盾地增加其MET剪切变体，从而抑制MMP9表达。
Conclusion
本次研究表明，佛波酯能够抑制人肺腺癌A549细胞的增殖和侵袭，并作用于NF-κB和MET通路从而缩小MMP-9的表达。这些结果提示佛波酯可能成为治疗肺腺癌的新药物。需要更进一步的研究，以深入了解佛波酯的潜在抗癌机制以及其在临床实践中的可行性。