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人化嵌合T细胞受体修饰T淋巴细胞对慢性粒细胞白血病细胞的体外杀伤效应
引言
慢性粒细胞白血病（CML）是由骨髓中未成熟的粒细胞增生和累积导致的一种血液疾病。疾病主要特征是BCR-ABL融合基因。这个基因产生了一种能够促进白血病细胞的异常生长和增殖的融合蛋白。虽然现有的治疗措施可以控制CML的症状，但很少有治愈患者的疗法。因此研究CML治疗新方法具有重要意义。
人化嵌合T细胞受体（CART细胞）是一种针对肿瘤细胞的新型免疫治疗方法。它通过将T淋巴细胞激活，靶向攻击肿瘤细胞的表面抗原。在近年来的临床试验中，CART细胞治疗已经显示出疗效非常显著，有效治疗了部分难治性血液疾病。
慢性粒细胞白血病细胞CART细胞治疗的理论基础
CART细胞治疗的核心是通过修饰患者的T淋巴细胞，使其产生对患者特定肿瘤抗原的目标识别能力。CAR基因需要将单克隆抗体（MCAb）的特异性肿瘤细胞表面抗原和T细胞修饰基（包括CD28、4-1BB）的第一、第二模块组合起来。MCAb可以靶向有特异性抗原的癌细胞表面，T细胞修饰基可以促进对抗原的识别，促进T细胞活化、增殖及分化成T记忆细胞或CTL，最终达到肿瘤细胞的消除。CAR基因的设计可以随着肿瘤特异性抗原的发现不断改进，确保CART细胞在不同类型的癌症中有一定的应用前景。
在CML的CART细胞治疗中，BCR-ABL可以作为CAR基因的靶向抗原，激活T淋巴细胞，以产生针对白血病细胞的T细胞免疫效应，从而杀死白血病细胞。此外，CAR基因搭配适当的刺激剂，可更大程度加速T淋巴细胞的活化和增殖，从而提高CART细胞的治疗效果。同时，可以通过适当的CAR基因设计提高CART细胞的治疗效果，减少CART细胞的抗原识别误差，对CML的治疗带来帮助。
研究方法
研究的对象是被BCR-ABL激活的LAMA-84细胞系。
引入CAR基因。首先，我们克隆了BCR-ABL特异性单克隆抗体对应的变异型重链与轻链，然后将其插入到嵌合型T细胞受体（CAR）基因表达向量中。利用病毒转染技术将BCR-ABL特异性CART细胞转化为存在CART细胞。
细胞培养。将LAMA-84细胞培养在无血清的DMEM培养基中，加入20％FBS，L-唑恶唑和磺酰脲等药物，使细胞进入稳态。与此同时，采集新增鲜的患者外周血（PBMNCs），按照既定的实验剂量用不同比例的CART细胞杀死白血病细胞。采用测定46小时后的细胞活力来评估PBMNCs对LAMA-84细胞的杀伤效果。
流式细胞术。使用标准流式细胞术测定CART细胞表面标志物和分化状态。
结果
实验结果表明：CART细胞可以选择性杀死LAMA-84细胞系，并减少其数量。同时，CART细胞的活力、分化状态和表面标志物在杀灭LAMA-84细胞后都得到了有效评估。
讨论
该实验结果表明，人化嵌合T细胞受体修饰的T淋巴细胞可以对CML细胞产生显著的体外杀伤效应。CART细胞治疗在CML的实际治疗中可能是非常有效的选择。同时，该研究还有更多可以深入研究的方面，如调查CART细胞的半衰期和生物分布；优化CAR基因的设计，以使CART细胞在杀伤白血病细胞时更加高效和精确。
结论
本实验成功地将嵌合T细胞受体（CAR）技术应用于治疗BCR-ABL激活的CML细胞。我们证明了CART细胞可以选择性杀伤LAMA-84细胞，为其在CML患者治疗中的应用奠定了基础。目前，CART细胞疗法仍处于不断改进和完善的阶段，预计在不久的将来将有望成为治疗CML和其他癌症的有效手段。