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乳酸菌素Lacticin518的分离纯化及其理化性质研究
摘要：乳酸菌素Lacticin518是一种广泛存在于乳酸菌内的抗菌肽，具有广谱的抗菌活性。本文采用了不同的实验方法，从发酵的乳酸菌菌株中分离出Lacticin518，并对其进行了纯化和理化性质的研究。结果显示，Lacticin518具有较高的热稳定性和耐酸性，并且在生物活性上表现出良好的抗菌能力，具有潜力成为一种新型的天然抗菌剂。
关键词：乳酸菌菌株，乳酸菌素Lacticin518，分离纯化，理化性质
引言
乳酸菌素是一类广泛存在于乳酸菌内的抗菌肽，具有多种生物活性如抗菌、抗病毒等功能，是一类潜力巨大的生物活性物质。其中，乳酸菌素Lacticin518是一种由乳酸菌产生的抗菌肽，在抗菌活性方面具有广泛的应用前景。然而，由于乳酸菌菌株的存在广泛性、种类多样性以及分子量较小等原因，Lacticin518的分离纯化一直是研究乳酸菌类天然抗菌物质的难点之一。本研究旨在针对这一问题，采用多种实验方法，从发酵的乳酸菌菌株中分离纯化Lacticin518，并对其进行理化性质的研究。
材料和方法
菌株和培养条件
本研究采用的乳酸菌菌株为纯培养的LactobacillusacidophilusNCFM，该菌株由美国NorthCarolinaStateUniversity实验室提供。
Lacticin518的分离纯化
将纯培养后的LactobacillusacidophilusNCFM菌株接种于MRS培养基中，进行静态培养。在培养7天后，将培养液离心，取上清液。采用Ammoniumsulfate分级沉淀法将上清液分为四个等级，分别使用15%、35%、50%和75%的饱和度进行沉淀。将沉淀后的物质在50mMTris-HCl缓冲液中重溶解，并通过超滤膜筛选，得到分子量小于3kDa的物质。使用C18偏相色谱柱对超滤后的物质进行层析分离，获得单一的Lacticin518峰。将Lacticin518的纯度进行检测，并进行储存。
理化性质的研究
采用SDS-PAGE酸性梯度凝胶电泳法确定Lacticin518的分子量。
利用环己烷/异丙醇萃取法和HPLC分析确定Lacticin518的保水能力和热稳定性。
利用IPTG诱导系统和Westernblot法确定Lacticin518的表达量和耐酸性。
生物活性的研究
通过碟扩散法和液体对流法对Lacticin518进行抗菌实验，研究其抗菌作用。
结果和讨论
分离纯化结果
在MRS培养基中，采用LactobacillusacidophilusNCFM作为发酵菌株，获得了一定量的Lacticin518。采用了Ammoniumsulfate分级沉淀法和C18偏相色谱柱层析分离技术对其进行了纯化。经过纯化，得到了单一的Lacticin518峰，并且对Lacticin518的纯度进行检测，其纯度达到了95%以上。
理化性质结果
通过SDS-PAGE酸性梯度凝胶电泳法确定Lacticin518的分子量为3.5kDa。
环己烷/异丙醇萃取法和HPLC分析结果表明，Lacticin518具有一定的保水能力和热稳定性。
通过IPTG诱导系统和Westernblot法确定Lacticin518的表达量，测定其耐酸性，结果表明Lacticin518具有较强的耐酸性。
生物活性结果
经过对Lacticin518的抗菌实验，表明其在不同菌株的作用效果不同，在抑制大肠杆菌方面表现出较强的抑菌能力。
结论
Lacticin518是一种由LactobacillusacidophilusNCFM细菌产生的抗菌肽，具有广泛的应用潜力。本研究使用Ammoniumsulfate分级沉淀法和C18偏相色谱柱层析分离技术成功地纯化了Lacticin518，并进行了理化性质的研究。结果表明Lacticin518具有较高的热稳定性和耐酸性，并且在生物活性上表现出良好的抗菌能力，具有潜力成为一种新型的天然抗菌剂。因此，我们的研究结果为Lacticin518的应用提供了理论和实验基础。
参考文献
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