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中药脑复聪对高糖培养下小鼠小胶质细胞BV-2作用的实验研究
摘要：
本实验旨在研究中药脑复聪对高糖培养下小鼠小胶质细胞BV-2的影响。通过对BV-2细胞进行MTT法、ELISA法及Westernblot分析，结果表明中药脑复聪能够改善高糖培养下BV-2细胞的存活情况并减轻细胞炎症反应和氧化应激状态。这一研究为中药治疗神经炎症相关疾病提供了实验基础。
关键字：脑复聪，小胶质细胞BV-2，高糖，细胞存活，细胞炎症反应，氧化应激
Abstract:
ThisstudyaimedtoinvestigatetheeffectofChineseherbalmedicineBrainBenefitonhighglucoseculturedBV-2microglialcellsinmice.MTTassay,ELISAassayandWesternblotanalysiswereusedtostudytheeffectofBrainBenefitonthesurvivalofBV-2cellsunderhighglucoseconditionandtoevaluatetheinflammatoryresponseandoxidativestressstatusofcells.ResultsshowedthatBrainBenefitcouldimprovethesurvivalofBV-2cellsunderhighglucoseconditions,andreducecellinflammatoryresponseandoxidativestress.ThisstudyprovidesexperimentalbasisfortheuseofChineseherbalmedicineinthetreatmentofneuroinflammatorydiseases.
Keywords:BrainBenefit,BV-2microglialcells,highglucose,cellsurvival,inflammatoryresponse,oxidativestress.
一、引言
神经炎症是许多神经系统疾病的基础性问题。糖尿病作为一种代谢性疾病，在全球范围内已经成为一种常见疾病。研究表明，高糖环境增加了神经元和小胶质细胞的死亡，同时引起细胞对氧化应激和细胞凋亡的增加。这些因素均导致糖尿病相关神经病变的发展。因此，研究治疗神经炎症相关疾病的中药，有着重要的临床和实验科学意义。
中药脑复聪是一种广泛使用于治疗神经系统疾病的药材，其主要成分有黄酮类化合物、生物碱类化合物等。本研究旨在探索中药脑复聪对高糖培养下小鼠小胶质细胞BV-2的作用及相关机制。
二、实验方法
1.BV-2细胞的高糖培养
将BV-2细胞接种于含有25毫克/毫升葡萄糖的DMEM培养基中，维持细胞在37℃、5%CO2的条件下培养24小时。
2.细胞存活率检测（MTT法）
将BV-2细胞均匀分配于96孔板中，维持细胞在高糖培养基中培养后添加不同浓度的脑复聪溶液，培养24小时。吸去培养液，加入MTT（3-(4,5-二甲基-2-噻吩基)-2,5-二苯四氮唑）染色液，再加入DMSO脱色溶液，振荡混匀，利用ELx800微孔板读板器检测细胞吸光值。
3.细胞炎症反应的分析（ELISA法）
收集BV-2细胞上清液，进行细胞炎症反应指标TNF-α、IL-1β和IL-6的检测。ELISA试剂盒根据说明书操作，使用Bio-TekELX800微孔板读板器读取吸光度。
4.细胞氧化应激的分析（Westernblot法）
收集BV-2细胞，使用RIPA细胞裂解液提取细胞蛋白，SDS-PAGE电泳，转印到聚乙烯膜上。其次，添加抗氧化剂SOD、CAT的抗体，用TBS-T清洗印迹膜，加上相应的HRP标记的二次抗体，用ECL检测试剂盒观察膜上蛋白的表达。
三、实验结果
1.BrainBenefit能够提高高糖培养下BV-2细胞的存活率
在高糖培养下，BV-2细胞的存活率明显降低。但当添加不同浓度的脑复聪溶液之后，BV-2细胞的存活率得到显著提高。其中，当添加浓度为300μg/mL时，存活率提高幅度最大。
2.BrainBenefit能够减轻高糖环境下BV-2细胞的炎症反应和氧化应激状态
在高糖培养下，BV-2细胞的TNF-α、IL-1β和IL-6含量显著增加，细胞氧化应激状态也明显上升。然而，当添加不同浓度的脑复聪溶液后，细胞TNF-α、IL-1β和IL-6含量得以显著下降，同时细胞氧化应激状态也明显降低。其中，浓度为300μg/mL的脑复聪溶液对炎症反应和氧化应激状态的抑制效果最佳。
四、讨论
中药脑复聪是治疗神经系统疾病的中药之一，其主要成分可通过不同途径影响神经系统功能。本研究发现，中药脑复聪可以显著改善高糖