东方田鼠KPNA2基因克隆及抗日本血吸虫实验研究.docx

东方田鼠KPNA2基因克隆及抗日本血吸虫实验研究
东方田鼠(KPNA2基因克隆及抗日本血吸虫实验研究)
摘要
东方田鼠是日本血吸虫的传播媒介之一，而KPNA2基因是核质转运蛋白α家族的重要成员，在细胞核内负责蛋白质的转运，其在寄生虫中的作用尚不清楚，因此本文旨在克隆东方田鼠KPNA2基因，并探讨其在抵抗日本血吸虫感染中的作用。通过PCR技术提取东方田鼠肝脏细胞总RNA，并进行KPNA2基因的克隆，同时构建KPNA2表达载体，经过验证后，进行了KPNA2的免疫荧光染色和Westernblotting实验，结果显示KPNA2基因在东方田鼠的肝细胞和脾细胞表达。在此基础上，进行了日本血吸虫感染的实验，发现KPNA2可以显著减少感染的发生率和感染后虫卵排泄量，且通过对炎症因子的检测，发现KPNA2可能通过抑制细胞因子的分泌来调节机体免疫功能。本研究资料为日本血吸虫感染的防治提供了新的思路和实验依据。
关键词：东方田鼠；KPNA2基因；日本血吸虫；免疫功能
Abstract
TheorientalmolecricketisoneofthetransmissionvectorsoftheJapaneseschistosoma.KPNA2geneisanimportantmemberofthenucleocytoplasmictransportproteinαfamily,responsiblefortransportingproteinsinthenucleus.Itsroleinparasitesisunknown,sothispaperaimstoclonetheKPNA2geneoftheorientalmolecricketandexploreitsroleinresistingJapaneseschistosomainfection.ThetotalRNAoforientalmolecricketlivercellswasextractedbyPCRtechnology,andtheKPNA2genewascloned.Atthesametime,theKPNA2expressionvectorwasconstructed,andaftervalidation,immunofluorescencestainingandWesternblottingexperimentswereconducted.TheresultsshowedthattheKPNA2genewasexpressedinlivercellsandspleencellsoforientalmolecrickets.Onthisbasis,theJapaneseschistosomainfectionexperimentwascarriedout.ItwasfoundthatKPNA2cansignificantlyreducetheincidenceofinfectionandtheamountofeggexcretionafterinfection.Bydetectinginflammatoryfactors,itwasfoundthatKPNA2mayregulatethebody'simmunefunctionbyinhibitingthesecretionofcytokines.ThisstudyprovidesnewideasandexperimentalevidenceforthepreventionandtreatmentofJapaneseschistosomiasis.
Keywords:Orientalmolecricket;KPNA2gene;Japaneseschistosoma;immunefunction
引言
日本血吸虫是一种广泛分布于全世界多个国家的寄生虫，其中东亚地区的感染人口数量较多。东方田鼠是日本血吸虫的传播媒介之一，在日本血吸虫传播和流行中具有重要作用。KPNA2基因是核质转运蛋白α家族的重要成员，在细胞核内负责蛋白质的转运。KPNA2基因在寄生虫中的功能尚不清楚，但其在细胞内的功能十分重要。因此，本研究旨在克隆东方田鼠KPNA2基因，并探讨其在抵抗日本血吸虫感染中的作用。
材料与方法
1.实验材料
东方田鼠（雄性，体重大约250克）；
日本血吸虫（感染绵羊）；
KPNA2基因全长序列（序列编号：NC_045449.1）。
2.实验方法
2.1KPNA2基因克隆
提取东方田鼠肝脏细胞总RNA，以其为模板进行反转录合成cDNA。
根据KPNA2基因全长序列，设计引物并进行PCR扩增，PCR条件为：94℃预变性3min，94℃denaturation30s，52℃annealing30s，72℃extension30s，共35个