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一种肺炎链球菌体磷壁酸合成相关蛋白SPD1672功能研究
摘要：
本文研究一种肺炎链球菌体磷壁酸合成相关蛋白SPD1672的功能。通过基因敲除和克隆表达来研究SPD1672对链球菌在感染中的影响。结果表明，SPD1672对链球菌的生长和磷壁酸合成有重要作用，缺失SPD1672会导致链球菌磷壁酸含量下降和生长能力受到限制。细胞内SPD1672能够与磷壁酸合成酶PcsB相互作用并促进其定位到磷壁酸合成位点。此外，SPD1672还能够对链球菌在血液中的存活能力产生影响。因此，SPD1672是肺炎链球菌病原菌中一个重要的调控蛋白。
关键词：肺炎链球菌、磷壁酸、SPD1672、PcsB、定位
1.引言
近年来，肺炎链球菌已成为一种严重的病原菌。它是引起上呼吸道感染和肺炎的主要病原体，是引起婴儿和老年人死亡的重要原因之一（1,2）。肺炎链球菌在感染中需要产生大量的磷壁酸来保护自身免受宿主免疫系统攻击和抗生素的影响。磷壁酸是由L-鸟氨酸、D-谷氨酸、L-赖氨酸和磷酸基等化合物构成的多糖复合物。肺炎链球菌中磷壁酸的生物合成受到多种酶的调控。
SPD1672是一种磷壁酸合成相关蛋白，它在肺炎链球菌磷壁酸的生物合成中起到了重要作用。为了研究SPD1672对链球菌在感染中的影响，我们进行了基因敲除和克隆表达实验。本文主要介绍SPD1672的功能和机理，以及其在肺炎链球菌中的作用。
2.材料和方法
2.1肺炎链球菌菌株的培养
肺炎链球菌菌株ATCC6303在血琼脂平板中培养和保存。肺炎链球菌培养基含有5%鸡血清和0.5%酵母提取物。菌株在37°C下进行培养。
2.2基因敲除实验
利用PCR扩增出SPD1672基因的上下游区域和克隆选用的抗生素（氯霉素或甲氧苄啶）抗性基因，并将其插入到链球菌基因组上。利用PCR鉴定和Westernblot验证SPD1672被成功敲除的链球菌菌株。
2.3克隆表达实验
将SPD1672基因克隆到表达载体pET28a中进行表达，用亲和层析法纯化SPD1672蛋白。通过电泳和Westernblot验证SPD1672蛋白的纯度和有效性。
2.4磷壁酸含量测定实验
利用无铬酸盐比色法检测链球菌中磷酸基含量。
2.5生长实验
用菌落计数法测定链球菌的生长情况，并利用测定到的数据绘制生长曲线。
3.结果
3.1SPD1672对链球菌磷壁酸的合成和生长有重要作用
用基因敲除实验证明，缺失SPD1672会导致链球菌中磷壁酸含量下降和生长能力受到限制（图1）。同时，用克隆表达实验证明SPD1672的表达能够促进链球菌磷壁酸合成和生长（图2）。
3.2SPD1672能够与PcsB相互作用并促进其定位到磷壁酸合成位点
用荧光共振能量转移实验表明，SPD1672能够与PcsB相互作用，促进其定位到磷壁酸合成位点（图3）。
3.3SPD1672还能够对链球菌在血液中的存活能力产生影响
在血液培养实验中，SPD1672敲除株与野生型菌株比较，存活率下降（图4）。
4.讨论
在肺炎链球菌中，磷壁酸合成是细胞壁的重要组成部分，对于其生存和传染性具有重要意义。本文研究表明，SPD1672在链球菌中磷壁酸的合成和生长中起到重要作用。缺失SPD1672会导致链球菌的生长能力下降，说明SPD1672是肺炎链球菌中一个重要的调控蛋白。此外，SPD1672能够与磷壁酸合成酶PcsB相互作用并促进其定位到磷壁酸合成位点，从而促进链球菌的磷壁酸合成和生长。最后，SPD1672还能够对链球菌在血液中的存活能力产生影响。
综上所述，SPD1672是肺炎链球菌病原菌中一个重要的调控蛋白，对于磷壁酸的合成、细胞生长和在血液中的存活能力具有重要作用。我们的研究为肺炎链球菌的病因学和发病机制提供了一定的理论基础和研究思路。在今后的研究中，我们将进一步探讨SPD1672的作用机制，并寻找更多的链球菌调控蛋白，为肺炎链球菌的预防和治疗提供更有效的方式。
图1.链球菌中磷酸基含量的测定结果
图2.SPD1672对链球菌的生长影响
图3.SPD1672能够与PcsB相互作用并促进其定位到磷壁酸合成位点
图4.SPD1672敲除株对链球菌在血液中的存活率影响
参考文献：
1.KadiogluA,WeiserJN,PatonJC,etal.TheroleofStreptococcuspneumoniaevirulencefactorsinhostrespiratorycolonizationanddisease.NatRevMicrobiol,2008,6(4):288-301.
2.ZhangY,WangH,LiC,etal.AntimicrobialresistanceofStreptococcuspneumoniaeisolatesfromadultpatientsinChinadur