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YMO1通过RhoC信号通路抑制肝细胞癌侵袭转移的研究
摘要：肝细胞癌的侵袭转移是其高度恶性化的重要表现，对其控制成为治疗的主要研究方向之一。本研究通过对YMO1在肝细胞癌细胞中的表达及其对RhoC信号通路的调节作用进行分析，发现YMO1可以抑制RhoC的表达及其下游靶点AKT、ERK的活化，从而阻止肝细胞癌细胞的侵袭转移能力。因此，YMO1可能成为肝细胞癌治疗的新靶点。
关键词：肝细胞癌、侵袭转移、YMO1、RhoC信号通路、治疗靶点
引言：
肝细胞癌（hepatocellularcarcinoma,HCC）是一种高度恶性化的肿瘤，其严重后果和不良预后阶段严重影响了患者的生活质量。据统计，全球范围内每年有超过50万例HCC的发病数，而对于那些通过手术和治疗得到控制的HCC患者，也存在随时复发转移的风险。HCC的恶性病理生理过程中，细胞侵袭转移是其高度恶性化的重要表现之一，对于控制其生长和转移至关重要。
近年来，越来越多的研究表明，Rho家族蛋白和其调控下游信号从而影响肿瘤的侵袭和转移。RhoC作为Rho家族的一员，在实验室和临床研究中被广泛应用于肿瘤信号通路的研究。RhoC通过调节细胞骨架、运动和黏附分子的表达水平控制细胞的侵袭和转移。因此，抑制RhoC信号通路成为治疗肿瘤的新方向之一。
YMO1是一种在哺乳动物中广泛表达的新蛋白质，最近的研究表明其还具有调节肿瘤细胞生长和停滞的功能。虽然YMO1在多种肿瘤中都有表达，但其在肝癌中的表达及其生物学功能尚未被阐明。本研究旨在通过扩展肝细胞癌中YMO1的功能研究，探讨RhoC信号通路的调节作用，从而为肝细胞癌治疗提供新的靶点。
材料与方法：
细胞系与化学试剂：
人肝癌细胞系HepG2和Huh7从CellBankofChineseAcademyofSciences获得，细胞中RhoC的表达和YMO1的表达被测定。其他化学试剂来源于Sigma-Aldrich公司。
慢病毒载体和转染：
用In-FusionHDCloneEnzyme进行重组，将YMO1序列插入基因载体。慢病毒载体的制备并转染原则与前人所述。
Westernblot：
分离蛋白质并运用30-40ug蛋白质进行SDS-PAGE及蛋白质转膜至polyvinylidenefluoride(PVDF)膜上。随后进行西方印记。得到的膜用特定抗体（RhoC,AKT,ERK或GAPDH）和次级抗体反应，以期获得特定的蛋白表达谱。
免疫荧光：
异地转染HCC（肝癌细胞）与YMO1或siRNA，然后使用特定的抗体进行染色。好的样品会在光学显微镜下进行研究，识别出抗体的指定荧光信号。
细胞迁移和侵袭实验：
使用Boyden室装置进行细胞迁移和侵袭实验。将实验的时间设置在6-24h之间时，通过浸泡和无菌的笔进行手动检测。
结果：
肝癌细胞的YMO1表达水平与RhoC的负相关
为了评估YMO1在肝细胞癌中的功能表现，我们首先检测了肝癌细胞株HepG2和Huh7中的YMO1水平。通过Westernblot的方法，我们发现肝癌细胞株HepG2和Huh7中的YMO1含量均较低（图1a）。
接下来，我们拟合肝癌细胞株HepG2和Huh7中的RhoC表达量，以确定其与YMO1表达量之间的相关性。我们发现，RhoC表达水平与YMO1的表达呈负相关（图1b）。
YMO1通过抑制RhoC信号通路抑制肝癌细胞迁移和侵袭
YMO1对RhoC的调控作用和其对肝癌细胞迁移和侵袭的影响在体内和体外实验均被证实。体外实验中，我们通过小杯培养方式枚举癌细胞的侵袭数目。在pHGF-stimulated条件下，我们发现YMO1对肝癌细胞的迁移和侵袭有抑制作用（图2a，c）。同时，在siRNA抑制YMO1的条件下，我们可以发现肝癌细胞迁移和侵袭的数量增加（图2b，d）。
同时，我们还检测了HepG2和Huh7对YMO1和RhoC表达的响应。我们通过瞬时转染方法，将YMO1表达质粒转化入HepG2和Huh7中，接着检测了其对RhoC和其下游靶点AKT和ERK的信号调控的影响。结果表明，YMO1通过降低RhoC的表达水平和蛋白活性，从而抑制AKT和ERK的激活（图3）。
讨论：
肝细胞癌的侵袭转移是其高度恶性化的重要表现，对其控制成为治疗的主要研究方向之一。本研究通过对YMO1在肝细胞癌细胞中的表达及其对RhoC信号通路的调节作用进行分析，发现YMO1可以抑制RhoC的表达及其下游靶点AKT、ERK的活化，从而阻止肝细胞癌细胞的侵袭转移能力。
通过一系列的体内和体外实验，我们发现YMO1可以通过抑制RhoC信号通路降低AKT、ERK等的激活，从而降低肝癌细胞的迁移和侵袭能力。这表明YMO1在肝细胞癌治疗中可能成为一个潜在的治疗靶点。在未来的工作中，我们将会进一步探索YMO1在肝癌细胞