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SiRNA下调bFGF基因对肺腺癌A549影响的相关性研究
摘要
本文旨在探究siRNA下调bFGF基因对肺腺癌A549细胞影响的相关性。首先通过文献综述介绍了肺腺癌的发病机制及相关因素和bFGF基因的作用机制，接着设计了实验方案并进行了实验。实验结果表明，通过siRNA下调bFGF基因可以显著降低A549细胞增殖和迁移能力，同时会影响该细胞系Bcl-2、MMP9和VEGF等基因的表达。综上所述，siRNA下调bFGF基因能够有效抑制肺腺癌A549的发展和转移，从而为临床治疗提供了重要的参考价值。
关键词：siRNA，bFGF基因，肺腺癌，细胞增殖，迁移，基因表达
Abstract
ThepurposeofthisstudywastoinvestigatethecorrelationbetweensiRNA-mediateddownregulationofbFGFgeneanditseffectonlungadenocarcinomaA549cells.Firstly,thepathogenesisandrelatedfactorsoflungadenocarcinomaandthemechanismofbFGFgenewereintroducedthroughliteraturereview.Then,theexperimentalplanwasdesignedandtheexperimentwascarriedout.TheresultsshowedthatthesiRNA-mediateddownregulationofbFGFgenecouldsignificantlyreducetheproliferationandmigrationabilityofA549cells,andaffecttheexpressionofgenessuchasBcl-2,MMP9andVEGFinthiscellline.Inconclusion,siRNA-mediateddownregulationofbFGFgenecaneffectivelyinhibitthedevelopmentandmetastasisoflungadenocarcinomaA549,providingimportantreferencevalueforclinicaltreatment.
Keywords:siRNA,bFGFgene,lungadenocarcinoma,cellproliferation,migration,geneexpression
1.引言
随着人口老龄化和环境污染等因素的影响，肺癌的发病率逐年增加，严重威胁着人类的健康。肺腺癌是肺癌的主要类型之一，约占所有肺癌的40%~50%。近年来，虽然肺腺癌治疗的手段不断完善，但是其治愈率仍然不高。因此，探究肺腺癌的发病机制及其治疗方法，对临床治疗具有十分重要的意义。
基本成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrowthfactor，bFGF）是一种多功能性细胞因子，对细胞增殖、分化、迁移等均有着重要作用。许多研究表明，bFGF在肿瘤生长和转移中起着至关重要的作用，与肺癌、乳腺癌、肝癌等多种癌症的发生和发展密切相关。因此，研究bFGF基因在肺腺癌中的作用机制，对于防治该疾病有着非常重要的意义。
利用小分子干扰RNA（smallinterferingRNA，siRNA）靶向下调bFGF基因表达已成为研究该基因作用机制的有效手段。本研究旨在探究siRNA下调bFGF基因对肺腺癌A549细胞的影响，以期为深入了解肺腺癌发病机制和研究新的治疗方法提供依据。
2.实验材料和方法
2.1实验材料
(1)A549细胞株（中国科学院细胞库）
(2)DMEM培养基，热失活胎牛血清（Gibco公司）
(3)Lipofectamine™RNAiMAX转染试剂（Invitrogen公司）
(4)siRNA（ShanghaiGenePharma公司）
(5)MTT试剂盒，RNA纯化试剂盒（Promega公司）
(6)RT-PCR试剂盒（Takara公司）
(7)Westernblot试剂盒（Beyotime公司）
(8)阻止剂（10%Tween20/TBS/BSA溶液）
(9)抗体：Bcl-2、MMP9、VEGF、β-actin（SantaCruzBiotechnology公司）
(10)过量选择素（G418）
2.2实验方法
2.2.1细胞培养和siRNA干扰
A549细胞在37℃恒温培养箱内，5%CO2条件下培养。取20μlsiRNA和200μlOpti-MEM，然后取1.25μlLipofectamine™RNAiMAX转染试剂添加至200μlOpti-MEM，并静置5min，然后混合两种液体。