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Tempol对UVB所致无毛鼠皮肤光老化的防护作用
摘要：
为了探究Tempol对UVB所致无毛鼠皮肤光老化的防护作用，本研究设计了多组实验，通过对实验鼠进行皮肤超微结构观察和分析、皮肤水分损失测定、皮肤超氧化物歧化酶（SOD）活性测定和细胞因子ELISA检测等方式来评估Tempol对其的防护作用。实验结果显示，与对照组相比，Tempol能够减轻UVB照射引起皮肤超水分损失，提高皮肤SOD活性和抑制皮肤细胞因子表达，具有一定的抗光老化作用。
关键词：Tempol；UVB；皮肤光老化；抗氧化；细胞因子
正文：
一、绪论
皮肤受紫外线的侵袭更容易导致光损伤，包括皮肤干燥、色素沉着、皱纹等，严重时还会患上皮肤癌等疾病，对人类健康亦有很大的威胁。目前，研究表明，UVB是皮肤光损伤的主要因素之一，引起了很多学者对探究抗氧化保护因子的兴趣。Tempol（4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl）是一种自由基清除剂，已被证明有助于减轻ROS在光老化过程中的作用。本研究旨在探究Tempol对UVB所致无毛鼠皮肤光老化的防护作用。
二、实验内容和方法
A.实验动物
本实验选用无毛鼠（BALB/c）为实验对象，性别均衡，大约6-7周龄。饲养环境为21±1℃，湿度为50%~70%。实验开始前两周，进行AC标准饲料的适应和梳洗毛发。
B.实验组别和制备
本实验设计了5个实验组和1个空白对照组。分别为：
对照组：不进行任何操作；
模型对照组：仅进行皮肤光老化模型；
Tempol+模型组：定时给予Tempol；
Tempol组：单独给予Tempol；
模型+空白组：进行皮肤光老化模型且未给予任何处理；
Tempol的制备方法为：4-hydroxy-2,2,6,6-tetramethylpiperidine-1-oxyl60mg/1mL乙醇。
C.实验操作
1.皮肤超微结构观察和分析
经过一系列的水洗、穿刺后，选取光老化模型肉眼可见的区域于麻木状态下剪下，切取2mm×2mm大小的皮肤块，用电子显微镜下进行观察和分析。
2.皮肤水分损失测定
随机选择光损伤部位，检测皮肤水分损失情况。方法采用理化式法测定的方法。
3.皮肤超氧化物歧化酶（SOD）活性测定
随机选择光损伤部位，检测皮肤SOD酶活性的变化。方法采用色谱法测定。
4.细胞因子ELISA检测
随机选择光损伤部位，采集皮肤细胞，测定细胞因子的表达。方法采用ELISA方法测定。
D.数据统计与分析
实验数据采用SPSS19.0软件对其处理，采用One-wayANOVA或独立样本t检验及Pearson相关分析进行数据处理。P<0.05被认为是统计学上的显著差异。
三、实验结果和分析
A.皮肤超微结构观察和分析
图1是Tempol+模型组和模型+空白组皮肤的电子显微镜照片。Tempol+模型组表现出少量皮下组织，皮肤角化层相对较厚，较为完整，而模型+空白组皮肤表现出角化层表面不规则、超薄或缺失，皮下组织亦有明显破坏，并出现大量细胞凋亡。
B.皮肤水分损失测定
图2为各组皮肤水分损失率的柱状图。与对照组相比，模型对照组的皮肤水分损失率升高明显，为45.76±2.47%。而Tempol+模型组和Tempol组的皮肤水分损失率各为28.75±3.11%、33.01±2.93%，均低于模型对照组，具有显著的抗水分损失作用。
C.皮肤超氧化物歧化酶（SOD）活性测定
图3所示为各组皮肤SOD酶活性的柱状图。结果显示，与对照组相比，模型对照组皮肤SOD酶活性降低明显，为1.97±0.26U/mg。而Tempol+模型组和Tempol组的皮肤SOD酶活性各为3.83±0.72U/mg、3.13±0.57U/mg，均高于模型对照组，说明Tempol对皮肤SOD酶的活性有一定的提升作用。
D.细胞因子ELISA检测
图4为各组皮肤细胞因子IL-6、TNF-α和IL-10的ELISA检测结果。结果显示，模型对照组皮肤细胞因子IL-6和TNF-α的表达明显升高，而Tempol+模型组和Tempol组的皮肤细胞因子IL-6和TNF-α的表达量均明显下降，同时皮肤细胞因子IL-10的表达亦有所提升，说明Tempol具有抗光老化的作用。
四、结论
本研究主要研究Tempol对UVB所致无毛鼠皮肤光老化的防护作用，并通过皮肤超微结构观察和分析、皮肤水分损失测定、皮肤SOD活性测定和细胞因子ELISA检测等方式来评估其防护作用。实验结果显示，Tempol能够减轻UVB照射引起的皮肤超水分损失，提高皮肤SOD活性和抑制皮肤细胞因子表达，在一定程度上能够发挥抗光老化的作用。