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SM22α和黄芩苷抑制血管平滑肌细胞增殖和新生内膜形成的分子机制
引言
血管平滑肌细胞增殖和新生内膜形成是动脉粥样硬化的主要病理生理学特征之一。动脉粥样硬化是一种慢性进行性疾病，期间会引发一系列并发症，如心脏病、中风和肾脏疾病，往往给患者的健康造成危害。因此，寻找有效的治疗方法和药物，尤其是注重发挥抑制血管平滑肌细胞增殖和新生内膜形成作用，有着重要的研究意义和临床价值。
SM22α是成熟平滑肌细胞的特定标记物，它是一种大小为22kDa的低分子量协同蛋白，主要在血管平滑肌细胞中表达。研究表明，SM22α参与了决定血管平滑肌细胞的收缩和增殖状态。黄芩素是一种在中药黄芩中存在的主要成分，现已被证明具有多种生理功能，其中包括抑制血管平滑肌细胞增殖等方面。因此，我们探讨了SM22α和黄芩素作用于血管平滑肌细胞增殖和新生内膜形成的分子机制。
MaterialsandMethods
1.材料
1.1细胞系
人类主动脉平滑肌细胞(HASMCs)
1.2试剂和抗体
黄芩素(HQS)
细胞增殖试剂盒
细胞凋亡检测试剂盒
兔抗人SM22α抗体（1:1000,SantaCruzBiotechnology）
2.方法
2.1细胞培养
将HASMCs分别培养在Dulbecco的修改Eagle培养基(DMEM)中，含10%胎牛血清、100U/mL青霉素和0.1mg/mL链霉素,37°C，5%CO_2,阳性空气。在70-80％细胞密度下，进行实验。
2.2细胞增殖试验
HASMCs在生长至约70%的细胞密度时，用1:4的倍数消化并接种在96孔板内，2×10^3/孔，分别处理空白对照组，各种浓度的HQs和不同浓度白蛋白(质量浓度为10μM)组。试验组计算48h后，用细胞增殖试剂盒测定细胞活性。
2.3细胞凋亡试验
HASMCs在生长至约70%的细胞密度时进行实验。将HASMCs分别处理HQs和不同浓度白蛋白(质量浓度为10μM)。不加任何处理的细胞为控制组，48h之后使用细胞凋亡试剂盒测定细胞的凋亡情况。
2.4Westernblotting
采用蛋白质提取剂从黑暗中配制细胞裂解液，总蛋白含量用BCA检测。将30μg的各组细胞蛋白质在10%聚丙烯酰胺凝胶上电泳分离，然后电转移到PVDF膜上。将膜切下，在5％非脂牛奶溶液中孵育2小时。其后，通过兔抗人SM22α抗体（1:1000,SantaCruzBiotechnology）进行一夜的孵育。在TBST中用联合辣根过氧化物酶，将膜显色，并且亮带扫描、数字化测量蛋白表达的相对强度。β-actin作为荧光内参。
结果
1.HQS抑制HASMCs的增殖能力
如图1所示，与空白对照组相比，HQs显着抑制了HASMCs的增殖，且该抑制呈剂量-反应关系。
2.HQS促进HASMCs凋亡
如图2所示,与空白对照组相比,300μM-concentration的HQs显著促进了HASMCs的凋亡过程。
3.HQS诱导SM22α表达增加
如图3所示，300μM-concentration的HQs显著增加HASMCs的SM22α表达。
讨论
HQS是一种在中药黄芩中存在的主要成分,已知在调节免疫反应和抗炎等方面拥有一定的效用，这表明楼黄芩素可能是一种潜在的药物治疗动脉粥样硬化的化合物。本研究的结果显示，HQs对HASMC的增殖具有明显的抑制作用，且该抑制呈剂量-反应关系。对比不加HQs的对照组，这个结果提示HQs对血管平滑肌细胞的增殖具有显著抑制作用。在不同浓度的黑暗中HQs处理下，研究还发现HQs显著促进细胞凋亡过程，提示HQs的抗肿瘤作用。因此,合理推断HQs抑制平滑肌细胞增殖，是由于其诱导平滑肌细胞凋亡所引起的。
SM22α表达是一种血管平滑肌细胞增殖和新生内膜形成的负调控因子，它能够抑制血管平滑肌细胞的增殖和降低血管内膜的甚至塑补。因此，我们进一步研究了HQs对SM22α表达的影响。结果表明，HQs可以显著地诱导SM22α的表达，这有助于防止血管平滑肌细胞的增殖和新生内膜形成。因此，HQs作为一种潜在的药物治疗动脉粥样硬化化合物，其可能通过诱导SM22α的表达来抑制血管平滑肌细胞的增殖和新生内膜形成。
结论
总之，本研究发现了HQs对于抑制HASMC增殖和诱导HASMC凋亡有显著的作用效果，同时HQs还能够诱导SM22α的表达，从而抑制血管平滑肌细胞的增殖和新生内膜的形成。因此，HQs可能成为新型治疗动脉粥样硬化的化合物之一，但其内部机制还需要进一步的研究和验证。