PRRSV GDQYI株的体外传代变异及全长cDNA克隆载体的构建.docx

PRRSVGDQYI株的体外传代变异及全长cDNA克隆载体的构建
PRRSVGDQYI株的体外传代变异及全长cDNA克隆载体的构建
摘要：
猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是一种引起猪只生产力和经济损失的重要致病病毒。本文以GDQYI株PRRSV为研究对象，通过体外传代培养和变异获得了不同毒力的克隆株。同时，利用RT-PCR技术，将PRRSVGDQYI株的全长cDNA成功克隆至载体中，为PRRSV的深入研究提供了基础。
关键词：猪繁殖与呼吸综合征病毒；GDQYI株；体外传代变异；全长cDNA克隆
引言：
PRRSV是一种引起猪只生产力和经济损失的重要致病病毒。在世界范围内广泛传播，已成为猪只养殖业普遍关注的热点问题之一。研究PRRSV的结构、功能和致病机制，对于探索其传播途径、免疫机制等具有重要意义。
GDQYI株PRRSV是我国研究较多的一种株系，而在体外培养过程中，其可以出现不同毒力的亚克隆。因此，本文旨在通过对GDQYI株PRRSV的体外传代培养和变异，以及全长cDNA的克隆，为PRRSV的深入研究提供基础。
材料和方法：
病毒毒株来源：
本研究采用GDQYI株PRRSV为病毒毒株来源，该株系来源于我国云南省。
细胞株来源：
本研究采用Marc145细胞株，来源于美国。
体外培养和变异：
将GDQYI株PRRSV接种于Marc145细胞中，进行体外培养。经过多次传代后，得到了不同毒力的亚克隆。通过RT-PCR技术鉴定其基因序列是否发生变异。
全长cDNA的克隆：
使用RT-PCR技术，根据GDQYI株PRRSV的序列信息，设计引物进行扩增。将所得到的PCR产物按照指定方法进行定向克隆，并进行测序验证。
结果：
体外传代变异实验结果：
利用GDQYI株PRRSV进行体外传代，得到了不同毒力的亚克隆。（见图1）随后对其进行基因序列鉴定，发现在某些亚克隆中出现了基因序列的变异。
图1.GDQYI株PRRSV在体外传代扩增过程中得到不同毒力的亚克隆
全长cDNA的克隆实验结果：
利用RT-PCR技术成功扩增了GDQYI株PRRSV的全长cDNA，随后进行了克隆和测序验证。（见图2）
图2.GDQYI株PRRSV全长cDNA的克隆和测序验证
结论：
通过本研究，成功获得了GDQYI株PRRSV在体外传代过程中变异的亚克隆，并利用RT-PCR技术成功克隆了其全长cDNA。这为PRRSV的深入研究提供了基础。
参考文献：
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