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miR-449a调控非小细胞肺癌迁移侵袭的作用研究
摘要
非小细胞肺癌是一种常见的恶性肿瘤，具有高度侵袭性和转移性。miR-449a是一种具有抑制肿瘤作用的微RNA，其在多种肿瘤中的表达下调与肿瘤的恶性度密切相关。本文对miR-449a调控非小细胞肺癌迁移侵袭的作用进行了研究。结果显示，miR-449a在非小细胞肺癌组织及细胞系中表达下调；同时，miR-449a过表达可以抑制非小细胞肺癌细胞的迁移、侵袭和侵袭相关因子的表达。进一步机制研究显示，miR-449a通过靶向G9a和PI3K/Akt/mTOR信号通路来发挥其抑制作用。本研究结果表明，miR-449a在非小细胞肺癌治疗中具有潜在的临床应用价值。
关键词：非小细胞肺癌，miR449a，迁移，侵袭，G9a，PI3K/Akt/mTOR
Abstract
Non-smallcelllungcancer(NSCLC)isacommonmalignanttumorwithhighinvasivenessandmetastasis.miR-449aisatumor-suppressivemiRNAthatisdownregulatedinvariouscancersandcloselyrelatedtothemalignancyoftumors.ThisstudyinvestigatedtheroleofmiR-449ainregulatingtheinvasionandmigrationofNSCLC.TheresultsindicatedthatmiR-449awasdownregulatedinNSCLCtissuesandcelllines.Moreover,overexpressionofmiR-449ainhibitedthemigration,invasion,andexpressionofinvasion-relatedfactorsofNSCLCcells.FurthermechanismstudiesrevealedthatmiR-449aexertedinhibitoryeffectsbytargetingG9aandthePI3K/Akt/mTORsignalingpathway.ThesefindingssuggestthatmiR-449ahaspotentialclinicalapplicationsinthetreatmentofNSCLC.
Keywords:Non-smallcelllungcancer,miR449a,Migration,Invasion,G9a,PI3K/Akt/mTOR.
引言
肺癌是世界上最常见的恶性肿瘤之一。其中，非小细胞肺癌（NSCLC）占据所有肺癌患者的85%以上。尽管近年来针对NSCLC的诊断、预防和治疗方面已经取得了重大进展，但由于其高度侵袭性和转移性，其治疗疗效仍然不理想，预后依然较差。因此，进一步探究NSCLC的发病机制及其调控机制，可能为NSCLC的治疗提供新的思路。
miRNA是由20-24个核苷酸组成的非编码RNA，在细胞内调控基因表达、细胞分裂、生长等进程中发挥重要的作用。其中，越来越多的研究表明miRNA与肿瘤发生、发展密切相关。miR-449a是一种新发现的miRNA，在多种肿瘤中表达下调，并具有有效的抑制肿瘤作用。此外，miR-449a还与多种细胞功能相关，如细胞生长、凋亡、侵袭和转移等。因此，本研究旨在探究miR-449a在NSCLC中的表达情况及其对NSCLC细胞的迁移及侵袭作用的机制探究。
材料与方法
组织样本
收集50例NSCLC患者的手术切除标本和20例正常肺组织标本，并通过免疫组织化学染色（IHC）检测miR-449a表达情况。
细胞系和转染
采用人类NSCLC细胞系A549作为研究对象，并构建miR-449a过表达和下调的细胞系，通过qRT-PCR检测其miR-449a表达水平。
细胞迁移和侵袭实验
采用Transwell实验，检测NSCLC细胞迁移和侵袭能力的变化。
Westernblot分析
采用Westernblot检测miR-449a对侵袭相关蛋白的表达影响，并检测G9a和PI3K/Akt/mTOR信号通路的变化。
统计分析
所有数据均经过统计分析，使用SPSS20.0软件分析t检验或方差分析，计算p值，p<0.05为统计学意义。
结果
miR-449a在NSCLC组织中表达下调
在50例NSCLC标本中，miR-449a的表达水平较正常肺组织有显著下调（p<0.05）（图1）。此外，miR-449a在多个NSCLC细胞系中也表达下调。
miR-449a过表达抑制NSCLC细胞迁移和侵袭
为探究miR-449a对NSCLC细胞迁移和侵袭的作用，构建了miR-449a过表达和下