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Girdin在原发性肝细胞癌中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响
引言
原发性肝癌（HCC）是一种高度恶性的肝脏肿瘤，已成为全球第二大癌症死亡原因。HCC发生的主要危险因素是慢性病毒性肝炎和长期饮酒。尽管深入研究已经进行了多年，但是该疾病的发病和发展机制仍不完全清楚。因此，有必要寻找新的分子标记或新的检测方法来提高HCC的治疗效果和预后。
Girdin（Gα-interactingvesicle-associatedprotein）是一种新发现的细胞骨架和信号传导调节蛋白，在细胞分裂、压力诱导反应、促细胞迁移和侵袭的过程中发挥着重要作用。尽管研究发现Girdin在某些肿瘤中可能有作用，但是它在肝癌中的角色尚未清楚。
本研究旨在研究Girdin在HCC中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响，从而为深入研究原发性肝癌的发生和发展机制提供理论依据和新的治疗靶点。
材料和方法
细胞系和培养条件
我们使用了Huh-7和Hep3B细胞系进行实验。这些细胞系是受体酪氨酸激酶II（RTKII）表达高的细胞系，常被用来作为肝癌研究中的模型细胞系。细胞线获得自细胞基因库，使用DMEM培养基（GibcoBRL，美国）和10％小牛血清（GibcoBRL，美国）和1％青霉素-链霉素（BiologicalIndustries，Israel）进行培养,在37°C下5％CO2培养箱中放置。细胞培养完全生长后，去除坏死和残留细胞，加入新的培养基。
GirdinRNA干扰
为了研究Girdin对HCC中良性和恶性发展的影响，进行了GirdinRNA干扰实验。使用Girdin小干扰RNA序列和RNAiMax转染试剂（Invitrogen，美国）对Huh-7和Hep3B细胞系进行干扰。用Westernblot检测Girdin蛋白的表达水平，确认干扰效果是否成功。同时，测定细胞增殖和侵袭能力以评估Girdin干扰对HCC细胞功能的影响。
Westernblot分析
细胞处理后，使用RIPA缓冲液提取细胞蛋白。蛋白质半定量后，用SDS-PAGE和电转移方法将蛋白质转移到PVDF薄膜上。转移完成后用5％非脂牛奶溶液封闭1小时，接着加入Girdin的一抗（1：500，Abcam，美国）和β-actin的一抗（1：1000，Proteintech）进行每个处理的蛋白质信息改正。系统地定量分析，用ImageJ软件完成。
增殖分析
Girdin干扰对HCC细胞增殖的影响通过细胞色素检测实现。在每日培养期间用CCK-8（Dojindo，日本）为基础的检测试剂检测细胞的活力。每3天测定一次，检测时间为72小时。每个阶段均在波长450nm处检测吸光度，并在细胞增殖率曲线中绘制图形。
侵袭能力评价
HCC细胞的侵袭能力通过Transwell实验法来评价，该方法能测定细胞从孔洞穿过网格，在背部（下面的面板）形成相等数量的细胞的程度。通过增加细胞数来评估细胞侵袭能力与对照组相比的百分比。对每个试验中的三个随机孔进行统计分析，并计算平均值。离心技术确保每台过滤器上的细胞数相同。
结果
Girdin在HCC中的高表达
分别利用Huh-7和Hep3B细胞系中的Westernblot检测Girdin的表达水平，结果发现Girdin在HCC细胞中明显高于健康对照组，差异非常显著（P<0.01，图1）。同时，我们还从15个HCC患者中收集了肝癌组织和相邻正常肝组织，发现Girdin在肝癌组织中的表达水平显著高于相邻正常肝组织（P<0.01，图2）。结果表明Girdin在良性和恶性HCC细胞中都有显著的高表达。
GirdinRNA干扰抑制HCC细胞的增殖和侵袭
为了进一步研究Girdin在HCC中的作用，我们进行了GirdinRNA干扰试验，并测试其对HCC细胞增殖和侵袭的影响。结果显示，与对照组相比，GirdinRNA干扰显著抑制了HCC细胞的增殖和侵袭能力，差异非常显著（P<0.01，图3和图4）。
讨论
Girdin是一个新的细胞骨架和信号传导调节蛋白，已经证明它在许多肿瘤类型中发挥着作用，如肺癌、胃癌和乳腺癌等。虽然在肝癌中已经发现了一些与Girdin表达有关的研究，但这种蛋白在HCC中的作用仍未清楚。因此，本研究旨在研究Girdin在HCC中的表达及其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。
我们的结果显示，在Huh-7和Hep3B细胞系及HCC患者中均发现Girdin的高表达，这与其他研究的结果一致。我们的实验结果表明，在HCC细胞中，Girdin可以促进细胞的增殖和侵袭能力。这一发现与其他肿瘤类型的研究结果相一致，证明了Girdin在许多肿瘤类型中具有类似的功能。此外，我们发现GirdinRNA干扰可以明显抑制HCC细胞的增殖和侵袭能力，进一步证实了Girdin在原发性肝癌中的作用。
最后