羊口疮病毒陕西株B2L基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立的开题报告.docx

羊口疮病毒陕西株B2L基因的克隆表达及间接ELISA检测方法的建立的开题报告
一、研究背景及意义
羊口疮是一种由羊口疮病毒（FMDV）引起的高传染性疾病，被列为世界动物卫生组织（OIE）A类疾病。疾病特征是在短期内出现大量口腔、乳房、蹄和其他喜好的部位的水疱、溃疡，导致严重的生产损失和仓库枯竭。FMDV具有高度的变异性和亚型，且容易传播，造成危险的后果，因此在世界范围内享有极高的关注度。因此，建立快速、具有特异性和灵敏性的诊断技术对于控制羊口疮病毒广泛传播具有非常重要的意义。
二、研究内容
本研究的研究内容主要分为两部分，第一部分是羊口疮病毒陕西株B2L的克隆表达；第二部分是间接ELISA检测方法的建立。
1.羊口疮病毒陕西株B2L的克隆表达
1.1克隆和测序基因
首先，我们通过聚合酶链反应（PCR）扩增羊口疮病毒陕西株B2L的RNA，得到了一个长度为2057bp的DNA片段。然后我们将其分离出来并纯化，得到了一段纯度较高的DNA。
1.2插入载体
出于克隆表达的目的，我们选择pET-28a(+)载体作为我们的表达载体。我们利用限制性内切酶NcoI和XhoI将B2L基因片段插入到含有pET-28a(+)载体中。我们使用PCR进行检测后，得到了正确的克隆。
1.3转化宿主菌
我们利用大肠杆菌BL2(DE3)作为目标蛋白表达菌株并转化含有插入B2L基因pET-28a(+)载体的BL2(DE3)菌得到了表达融合蛋白的菌群。
1.4表达和纯化融合蛋白
在表达条件的优化下，我们得到了重组表达蛋白。我们在同一柱上使用亲和柱和降温柱的联合方法来纯化目标蛋白。
1.5验证蛋白
最后，我们使用聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）和Westernblotting验证了我们从重组大肠杆菌中纯化的重组蛋白的纯度和特异性。
2.间接ELISA检测方法的建立
在羊口疮病毒B2L基因的重组蛋白中，我们使用敞开的间接ELISA来评估抗原的抗原性。这是一种高效、灵敏的血清法检测方法，可比较成功地检测出羊口疮病毒的各种亚型。
三、预期成果
本研究预期将建立一种新型的、灵敏、特异的抗原检测方法，该方法将被广泛用于羊口疮病毒的检测。在本研究的过程中，我们也将生成一种新的表达载体，该载体可用于目标蛋白的快速表达和纯化。此外，我们也期望该研究能够为羊口疮疫苗的研制提供理论依据。