水稻WRKY转录因子SUSIRI的原核表达及其靶基因的初步筛选的任务书.docx

水稻WRKY转录因子SUSIRI的原核表达及其靶基因的初步筛选的任务书
任务：
对水稻中的WRKY转录因子SUSIRI进行原核表达，同时初步筛选其靶基因，探究其在水稻中的功能。
任务说明：
水稻是全球最重要的粮食作物之一，它的重要性在于其是世界上最重要的食物来源之一。为了提高水稻产量和抗逆能力，研究水稻中的转录因子显得十分必要。WRKY转录因子家族是重要的转录因子，在植物中起着重要的调控作用，对于植物的生长发育和逆境胁迫具有重要的作用。在水稻中，WRKY家族的成员也十分重要，其中SUSIRI是一个新的WRKY转录因子。
为了进一步了解SUSIRI的结构和功能，我们将对其进行原核表达，并对其靶基因进行初步筛选。
具体实验方案如下：
一、原核表达SUSIRI
1.制备pET-28a-SUSIRI重组质粒
a.在NCBIGenBank数据库中，下载并提取SUSIRI对应的cDNA序列
b.设计适合SUSIRI的引物，利用PCR方法扩增其全长cDNA序列
c.将PCR产物与pET-28a重组质粒进行连接，得到pET-28a-SUSIRI重组质粒
2.转化E.coliBL21(DE3)菌株
a.将pET-28a-SUSIRI重组质粒进行质粒提取
b.用CaCl2法将重组质粒转化到E.coliBL21(DE3)菌株中
3.诱导SUSIRI的原核表达
a.从转化成功的菌株中选取单克隆进行培养
b.在感受态菌株中诱导表达SUSIRI
c.通过SDS-PAGE或Westernblot等技术检测SUSIRI的表达情况
二、初步筛选SUSIRI的靶基因
1.构建水稻基因芯片
a.通过NCBIGenBank数据库，下载水稻基因组的全长cDNA序列
b.设计引物，将cDNA序列扩增并克隆到芯片上
2.RNA样品处理、荧光标记和杂交实验
a.将水稻幼苗表达SUSIRI时的RNA样品进行提取和精制
b.在RNA样品中引入荧光标记，并进行杂交实验
3.筛选靶基因
a.对杂交实验所得的数据进行分析，筛选出与SUSIRI结合最紧密的基因
b.使用实时荧光定量PCR（qPCR）对筛选出的基因进行验证
本实验旨在探究水稻中新的WRKY转录因子SUSIRI的功能及其靶基因，为进一步了解其在水稻生长发育和逆境胁迫中的作用提供重要依据。