重组酶介导等温核酸扩增技术快速检测烟曲霉菌的任务书.docx

重组酶介导等温核酸扩增技术快速检测烟曲霉菌的任务书
一、任务描述
本任务旨在利用重组酶介导等温核酸扩增技术（recombinasepolymeraseamplification,RPA）快速检测烟曲霉菌（Aspergillusflavus）。
烟曲霉菌是一种常见的霉菌，能够在农产品和食品中生长繁殖，会产生致癌的黄曲霉毒素，对人类健康造成危害。目前，烟曲霉菌的检测方法多是基于PCR技术，但其需要复杂的仪器和高水平的操作技术，同时花费较高。因此，本任务计划采用RPA技术，这是一种仪器简单、操作方便的核酸扩增技术，能够在30分钟内快速检测出目标菌。
二、任务内容
1.收集烟曲霉菌的实验样本，并对其进行处理和提取DNA。
2.设计RPA实验方案，制备RPA试剂。
3.进行RPA实验，对不同浓度下的烟曲霉菌进行扩增，观察扩增效果。
4.优化实验条件，例如优化反应体系、优化扩增时间和温度等。
5.验证RPA技术的特异性和灵敏度，通过比对其他菌的DNA序列以及在已知菌种中检测出烟曲霉菌的数量等方案进行检测验证。
6.制备并评估建立的检测方法所需的试剂盒，包括检测效率、准确性、重复性等。
三、任务要求
1.所提供的RPA实验方案应注意到实验条件的优化以及特异性、灵敏度等关键指标；
2.样品处理和DNA提取应注意到技术的规范性与保持检测灵敏度；
3.试剂的制备应严格控制，保证稳定性；
4.除了RPA技术本身，实验者需掌握测序、多样性分析以及比对分析等关键技术；
5.实验者需具备团队协作与交流沟通能力。
四、参考资料
1.Piepenburg,O.,Williams,C.H.,Stemple,D.L.,&Armes,N.A.(2006).DNAdetectionusingrecombinationproteins.PLoSbiology,4(7),e204.
2.Daher,R.K.,Stewart,G.,Boissinot,M.,&Bergeron,M.G.(2016).Recombinasepolymeraseamplificationfordiagnosticapplications.Clinicalchemistry,62(7),947-958.
3.国家食品安全重点实验室检测方法室.食品中烟曲霉菌检测方法：液相色谱-串联质谱法（GB/T24687-2009）[S].北京市:中国标准出版社,2009.
4.Chen,C.,&Ge,B.(2018).DevelopmentofarecombinasepolymeraseamplificationassayforAspergillusflavusdetection.Analyticalbiochemistry,542,7-12.