血管瘤型J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆与表达的任务书.docx

血管瘤型J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆与表达的任务书
任务书
课题名称：血管瘤型J亚群禽白血病病毒gp85基因的克隆与表达
任务背景：
白血病是一种危害性较大的动物病害，目前已知的病原体包括病毒、细菌、真菌等多种。禽白血病病毒（Avianleukosisvirus，ALV）是一种常见的禽病毒，可以引起家禽的白血病、肿瘤和其他疾病。ALV具有多种亚群，不同亚群的病毒具有不同的致病性和传播途径，对养殖业和禽类健康造成了一定的威胁。
其中血管瘤型J亚群ALV是目前最广泛的亚群之一，其病毒粒子具有高度的稳定性和传播能力，对鸡的生产和禁用造成了很大的影响。因此，研究ALV血管瘤型J亚群的病毒基因结构及其生物学特性，对于提高禽类养殖业的生产效益和水平具有重要的意义。
任务内容：
本课题的研究重点是对ALV血管瘤型J亚群的gp85基因进行克隆和表达。
1.gp85基因的克隆
首先，需要先获取ALV血管瘤型J亚群病毒的RNA。采用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）方法，从感染病鸡的肿瘤组织中扩增gp85基因。
在进行PCR反应前，需要设计一对合适的引物（Primers），并考虑到引物的长度、温度和特异性等因素。然后进行RT-PCR反应，PCR产物进行电泳分离，提取目标片段，进行比对验证，如有需要继续扩增。
2.gp85基因的表达
将扩增得到的gp85基因片段克隆至适合表达的载体中，用细菌的转化技术将其转化到感受态细菌中。
接下来是表达流程：
①筛选
从转化得到的细菌液中，挑选阳性克隆并培养。
②感受态Induction的优化
如胶体南方杂交分析得到的阳性克隆的发酵滤液中鱼精蛋白提取液显然表达蛋白，需要对表达条件进行优化。调整感受态诱导的时间、诱导剂的浓度等条件，找到最优的表达条件。
③蛋白提取
收集摇瓶发酵液，离心去细胞。将沉淀用蒸馏水充分洗涤，并用鞘氨醇进行细胞破裂，得到蛋白质。制备过程中需要使用不同浓度和类型的缓冲液及蛋白酶抑制剂。
④分离纯化
对得到的蛋白质进行分离纯化，使用质量分数测定，用Westernblot检测表达目标蛋白。
任务目的：
通过对ALV血管瘤型J亚群的gp85基因的克隆和表达，我们可以获取该病毒亚群的特异性蛋白，并进一步研究其生物学特性和致病机制。同时，对ALV病毒的基因结构和功能有更深入的认识，也可以为疫苗开发和防治提供重要的参考。