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黄花苜蓿NAC转录因子的初步研究的开题报告
一、选题背景与意义
黄花苜蓿（MedicagosativaL.）是世界上广泛应用的优良牧草种类之一，其富含高质量的蛋白质、维生素和矿物质，对提高畜牧业生产效益具有重要意义。而NAC转录因子是调控黄花苜蓿干旱、盐碱胁迫、病虫害等方面的重要调节因素。然而，至今尚未有关于黄花苜蓿NAC转录因子的深入研究，因此，对其进行初步探究，可以为进一步研究其功能提供有力支持，进而为黄花苜蓿产业的发展做出贡献。
二、研究内容及目标
本研究将深入解析黄花苜蓿中NAC转录因子家族的成员结构、进化关系、表达模式及功能。通过对NAC转录因子的克隆与分离，筛选其两个亚基序列并进行拼接，建立NAC基因的全长cDNA序列，以便对其进行后续的表达及功能分析。利用Real-timePCR技术对不同发育阶段、干旱、盐碱等胁迫处理下的样品进行RNA抽取，测定其NAC基因家族的表达模式。同时，在获得合适的材质后，对该NAC基因家族进行功能鉴定，以探究其在黄花苜蓿干旱、盐碱胁迫等方面的调节作用。
三、研究方法
1.RNA抽取与cDNA合成：对不同发育阶段、干旱、盐碱等胁迫处理下的黄花苜蓿植株进行RNA抽取，使用逆转录酶M-MLV进行反转录，合成cDNA模板。
2.克隆黄花苜蓿中NAC基因的两个亚基序列并进行拼接，建立该NAC基因的全长cDNA序列。
3.构建重组质粒，将NAC转录因子基因导入拟南芥中，采用RT-PCR等方法检测转录因子基因在拟南芥中的表达情况，进一步检验黄花苜蓿NAC转录因子的功能。
4.Real-timePCR：对收集的黄花苜蓿植株的RNA进行筛选、反应，提取所有数据中NAC家族基因的CT值。
5.对表现出差异性的NAC家族基因进行分析，运用Bioinformatics的技术进一步验证其差异性表达的原因。
四、研究预期成果
预计本研究对于黄花苜蓿NAC转录因子的表达模式、调节作用等方面进行初步分析，为后续黄花苜蓿NAC基因家族的功能分析以及黄花苜蓿新品种的设计提供重要的基础。相信会为黄花苜蓿产业的发展做出贡献。