蛋白激酶Plk1调控人端粒酶催化亚基hTERT的功能研究的任务书.docx

蛋白激酶Plk1调控人端粒酶催化亚基hTERT的功能研究的任务书
任务书
一、研究背景
人端粒酶催化亚基hTERT是一种核酸酶，它可以为染色体末端的端粒提供长度和稳定性，维护正常的染色体复制和稳定。在许多癌症细胞中，hTERT的表达水平显著升高，使得这些细胞能够不断地分裂和生长，增加它们的恶性程度。因此，了解hTERT的调控机制对于了解癌症的发生和发展有着重要的意义。
多种蛋白激酶已经被发现与hTERT的调控有关，其中，Polo样激酶1（Plk1）是最常见和最重要的一种，它已经显示出在多种癌症中的表达水平显著增加。然而Plk1对hTERT的调节机制尚不清楚，需要进一步研究。
二、研究目的
本研究的目的是探究Plk1对hTERT功能的调节机制，包括Plk1与hTERT的相互作用、Plk1对hTERT催化活性和DNA结合活性的影响，以及Plk1对hTERT在癌症细胞中的表达和功能的调控作用。
三、研究内容和方法
1.检测Plk1和hTERT在肿瘤细胞中的表达水平
使用Westernblotting和实时荧光定量PCR检测Plk1和hTERT在肿瘤细胞中的表达水平，比较不同细胞系之间的差异。
2.探究Plk1与hTERT的相互作用
重组Plk1和hTERT的His-tagged和Flag-tagged蛋白质在HEK293细胞中共同过表达，利用共免疫沉淀和GSTpull-down实验检测Plk1和hTERT的相互作用情况。
3.检测Plk1对hTERT催化和DNA结合活性的影响
使用TRAP和EMSA实验检测Plk1对hTERT催化和DNA结合活性的影响。
4.探究Plk1对hTERT在癌症细胞中的表达和功能的调控作用
利用CRISPR/Cas9基因编辑技术在肿瘤细胞中敲除或过表达Plk1，检测其对hTERT的表达水平和功能的影响。
四、研究意义
本研究将有助于深入了解Plk1对hTERT功能的调控机制，并为解释癌症细胞中hTERT表达水平升高的机制提供新的视角。此外，这些发现可能为开发新型肿瘤治疗策略提供有用的线索。