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犬下颌牵张成骨中与血管生成相关的lncRNA初步研究的开题报告
开题报告
一、选题背景
犬是人类习以为常的重要宠物和工作伙伴，其口腔疾病常常严重影响其生活质量。犬下颌牵张成骨是一种牙齿根区牵张的牙周病治疗技术。该技术通过在下颌骨内放置压力钩和弹簧，引发机械应力反应，诱导下颌骨骨组织增生和成骨。然而，目前对犬下颌牵张成骨后相关的分子机制研究还很有限。
长链非编码RNA(lncRNA)是一种长度大于200个核苷酸的非编码RNA。在多种生物学过程中，它们被已知为在基因表达调控、以及细胞增殖、分化和凋亡中发挥重要功能。最近的一些研究表明，lncRNA在兽医学的分子调控机制中也发挥重要作用，尤其是在病毒感染、癌症、心血管疾病中。因此，本研究计划尝试探讨犬下颌牵张成骨后，与血管生成相关的lncRNA在该过程中的可能功能，为进一步深入分析犬口腔疾病的分子机制提供参考。
二、研究目的
本项研究的目的是初步筛选出与血管生成相关的潜在lncRNA以及评估它们在犬下颌牵张成骨中的可能功能。通过RNA高通量测序分析和生物信息学技术，挖掘不同成骨时间点的差异表达lncRNA和基因，并利用qRT-PCR方法进行验证。进一步，我们将采用RNA干扰技术和转染实验来评估每个潜在lncRNA的可能功能，重点关注血管生成相关的信号通路及其细胞生物学效应。
三、研究方法
(1)RNA高通量测序
收集3只犬下颌牵张成骨过程中不同时间点（1周、2周、4周）的牙槽嵴组织，由基因芯片分析来筛选不同表达的lncRNA。通过双末端cDNA聚合酶链反应（dUTP法）进行测序。聚类分析、差异表达基因分析以及功能注释等综合分析方法，挖掘与血管生成相关的潜在lncRNA。
(2)qRT-PCR验证
本研究将挑选出几个具有代表性的潜在lncRNA，分别采用qRT-PCR技术在不同时间点的成骨过程中进行验证，以确定其在牙尖嵴成骨中的表达模式。
(3)RNA干扰和细胞转染实验
本研究将针对表达不同的潜在lncRNA通过RNA干扰技术，将它们在犬下颌牵张成骨实验中转录入靶细胞中，调查其在细胞的生物学功能和血管生成相关的物质水平上的影响。采用ELISA和Westernblot等技术，检测细胞中VEGF等促血管生成物质的变化。
四、预期结果
通过RNA高通量测序分析和生物信息学技术，本项研究将初步筛选出犬下颌牵张成骨过程中与血管生成相关的潜在lncRNA。采取qRT-PCR技术进行验证并联合RNA干扰技术和细胞转染实验，了解每个潜在lncRNA在细胞的生物学功能和血管生成相关物质水平上的影响，最终探究这些潜在lncRNA在表达水平和功能上的调控机制。这些研究结果将为进一步解析犬口腔疾病的分子机制提供基础，并有助于发展潜在的lncRNA作为治疗靶点。
五、研究意义
本项研究将为探明犬下颌牵张成骨过程中的分子机制提供基础性的研究数据，促进对口腔疾病的分子机制和治疗方法的全面了解。同时，通过研究与血管生成相关的潜在lncRNA，本项研究将有助于扩展对lncRNA在兽医学中的应用前景，为兽医学的分子调控机制提供新见解。