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甲烷通过保护线粒体功能减轻DCD大鼠供肝冷保存-再灌注损伤的实验研究的任务书
任务书
任务名称：甲烷通过保护线粒体功能减轻DCD大鼠供肝冷保存-再灌注损伤的实验研究
任务描述：
随着肝移植技术的快速发展，肝脏不可逆的病变限制了肝脏移植手术的普及程度。肝脏冷存的过程导致肝脏功能严重受损，再灌注期间诱发的损伤也限制了移植后的肝功能恢复。因此，寻找对冷存损伤具有明显保护作用的方法具有重要意义。
甲烷气体具有多种生物学特性，如抗氧化、抗炎和细胞保护作用。多项研究表明，甲烷具有保护心肌、脑组织等器官的功能。然而，甲烷是否可用于预防供肝冷保存-再灌注损伤仍需进一步探究。
本任务的研究目的是探讨甲烷在减轻肝脏冷藏-再灌注损伤中的保护作用，并进一步探究其保护机制为何。具体任务如下：
任务一：建立DCD大鼠供肝冷存-再灌注损伤模型
1.1选取40只体重250-300g的SD大鼠，分为4组：正常对照组、模型组、甲烷组和氧气组。
1.2将所有大鼠随机编号，采用麻醉药注射法将其麻醉。
1.3暴露肝脏，并使用均等的力量在肝左、右，上、下方向取下左右叶、中叶、尾叶组成供肝。
1.4用冰盐水清洗供肝，然后将其放置于透明的冰柜中进行冷保存，保持在4°C下。
1.5在冷保存3h后，再将供肝取出，再灌注4h。
任务二：给予甲烷及氧气预处理
2.1甲烷组大鼠：在灌注前鼻腔内注入100%甲烷气体，每次吸入20ml，总计4次。
2.2氧气组：在灌注前鼻腔内注入100%氧气，每次吸入20ml，总计4次。
任务三：尸肝灌流及检测
3.1在再灌注前，将全血肝灌流MPSⅡ（10g/100ml盐水）。
3.2在再灌注4h后，通过取心脏采集大鼠血液，进行肝功能指标测试。
任务四：组织形态学及转移学
4.1用10%甲醛固定肝组织，并进行石蜡包埋、切片和H&E染色。
4.2采用始基抗体进行免疫组化，检测线粒体活性相关指标Nrf2、NQO-1、Mfn2的表达情况。
任务五：数据分析
5.1将所有数据输入Excel表格中，进行统计学分析。
5.2使用SPSS软件进行一般偏移方程线性组合模型拟合分析。
5.3采用t检验和方差分析（ANOVA）检验为显著性水平。
研究预期结果：
本研究预计通过甲烷气体预处理对供肝冷存-再灌注损伤模型的实验探究，进一步探究甲烷在缓解供肝冷存-再灌注损伤中的保护作用及其机制，为肝移植手术的临床转化提供新思路和理论基础。