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RNAi技术沉默OPG基因对骨髓间充质干细胞RANKL、OPG表达变化研究的开题报告
一、研究背景
骨骼系统是人体一个重要的器官系统，它不仅仅是负责支撑人体的框架，更是新陈代谢、造血等功能的重要场所。骨质疏松症是一种慢性进行性骨代谢疾病，它是指骨组织的密度减少、结构松散和微结构破坏，以致于骨折易发生，从而影响生活质量。骨质疏松症的形成是多种因素的综合作用，其中包括许多细胞因素的调控，例如，细胞因子、生长因子、激素、细胞外基质分子等。近年来，研究表明，骨髓间充质干细胞（BMSCs）具有极其重要的作用，而骨髓中的干细胞可通过产生各种细胞系不断生为新的骨组织，维持骨骼系统基本生理功能与协调调节。
在骨骼系统的研究中，骨强度的维持除了骨矿物质的含量和骨组织的微结构外，还与骨吸收和生成的平衡以及骨质调节因子的分泌有关。目前已知的骨质调节因子中，核心调节因子是RANKL/OPG系统，即RANKL与其相对应的受体RANK的结合会导致骨吸收的增强，而RANKL受到OPG（osteoprotegerin，骨保护素）的抑制，从而抑制骨吸收。在骨髓间充质干细胞的研究中，OPG基因起重要作用，有关OPG基因对骨髓间充质干细胞RANKL、OPG表达变化的相关研究十分重要。
二、研究目的
通过RNAi技术沉默OPG基因，观察BMSCsIFNγ和LPS诱导条件下的RANKL和OPG的表达变化，分析OPG在IFNγ和LPS诱导条件下对BMSCs中RANKL/OPG系统的调节作用。
三、研究方法
1.RNAi技术沉默OPG基因
设计Oligo：
OPGsiRNAsense:5’-CCAGTCAAGTGGTGGCCAA-3’
OPGsiRNAantisense:5’-TTGGCCACCACTTGACTGG-3’
2.转染沉默OPG基因
选取沉默效果明显的干扰RNA进行转染。将OPGsiRNA和Lipofectamine2000混合后加入到BMSCs中，进入60%密度的细胞为转染对象。
3.细胞培养
BMSCs培养于α-MEM（HyClone）+10%FBS中，37°C，5%CO2，通量为1×106/ml。分为对照组和沉默OPG基因组。
4.实验处理
对照组和沉默OPG基因组分别进行IFNγ和LPS处理，处理后进行细胞收集。
5.RT-qPCR
总RNA提取并进行RT-qPCR分析。模板cDNA中加入SYBRGreenⅠ探针，97°C2min，93°C10s，48°C20s，72°C20s共40个周期。
6.数据统计
实验将进行三次，数据通过SPSS统计软件进行统计学差异分析。
四、研究意义和预期结果
通过该研究，我们可以更深入地了解OPG基因在BMSCs中的重要作用，以及其在IFNγ和LPS处理条件下对RANKL/OPG系统的调节作用，并为骨质疏松症的临床治疗提供新的思路和目标。预期的结果是，通过RNAi技术沉默OPG基因，可以使BMSCs中RANKL的表达升高，OPG的表达下降，从而更清晰地了解OPG在骨髓间充质干细胞RANKL、OPG表达上的调节作用。