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基于滚环策略的环状RNA富集技术的初步研究的开题报告
一、研究背景和意义
环状RNA（circRNA）是一类新型的非编码RNA（non-codingRNA），具有环状拓扑结构。与线性RNA相比，circRNA在生物学过程中具有更高的稳定性和更强的表达特异性。circRNA长期以来被认为是一类无功能的RNA，然而越来越多的研究表明，在细胞的生命活动中扮演着重要的生物学功能。例如，circRNA可以作为miRNA和蛋白质的海绵来调控基因表达，也可以作为模板产生蛋白质，直接参与蛋白质合成。因此，circRNA在生物医学研究中具有重要的应用价值，如作为潜在的生物标志物和疾病靶点。
然而，circRNA研究受到的阻碍比较多，其中一个重要的因素是circRNA的富集和检测。目前的circRNA检测技术主要包括RNA膜迁移、定量PCR和高通量测序。虽然这些技术已经能够检测circRNA，但是circRNA存在着多项生物学特性，因此需要开发新的富集技术以提高其检测的灵敏度和特异性。
二、研究目的
本研究旨在开发一种新的circRNA富集技术，称为基于滚环策略的环状RNA富集技术，以了解circRNA在细胞周期中的表达情况，并探究其与细胞周期的关系。该技术在circRNA的高通量筛选、生物标记物鉴定和RNA序列应用研究中具有广泛的应用前景。
三、研究内容与方法
1.建立环状RNA富集策略：首先，我们将采用架桥酶的转录，将某种适宜的滚环反向引物引导到circRNA的后内含子上，在反向引物作用下形成滚环结构，然后通过亲和层析分离circRNA和线性RNA。
2.筛选细胞周期差异表达circRNA：利用本文建立的环状RNA富集技术，从细胞中富集circRNA，然后经过凝胶电泳和RNA测序技术，对circRNA进行全转录组分析，筛选细胞周期差异表达的circRNA。
3.探究circRNA与细胞周期的关系：通过对差异表达的circRNA进行GO和KEGG通路分析，进一步了解circRNA与细胞周期之间的关联。同时，我们将利用qPCR和RNAi技术进一步验证这些circRNA的生物学功能和分子机制。
四、预期结果及意义
我们希望通过建立基于滚环策略的环状RNA富集技术，能够有效提高circRNA检测的灵敏度和特异性，并在细胞周期中的表达差异及生物功能方面进行探究，为理解circRNA在细胞周期调控中的作用提供新的思路和研究依据。同时，该技术可用于从其他组织和生物体内筛选circRNA，为circRNA生物学特性的研究提供有力的工具和手段。