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LPS对RSV感染小鼠气道炎症和气道高反应性的影响及其机制研究的任务书
一、研究背景
呼吸道合胞病毒(RSV)是一种常见的致病基因，其感染在全球范围内造成了严重的冬季呼吸道疾病，尤其是对婴儿和年龄较大的人群的影响更为严重。RSV感染的病理生理主要表现为气道高反应性和气道炎症。多种基因、环境和免疫学因素可以调控RSV感染相关的症状和病理表现。其中，病毒侵入气道上皮细胞后释放的内源性物质被认为是引起气道炎症和高反应性的主要因素之一，其最终效应是导致一系列炎症因子的释放，包括细胞因子、趋化因子和炎性介质。
脂多糖(LPS)是一种由革兰氏阴性菌在其细胞壁上所表达的脂质分子，它在活体内的生物学作用极为复杂，包括诱导免疫反应和促进炎症等。许多研究表明，LPS作为伪装的外源性生物反应发生器，可以使细胞内的Toll样受体-4(TLR-4)激活，从而刺激细胞分泌一系列炎症介质并激活免疫系统，导致炎症反应和免疫应答的发生。在RSV感染中，LPS与RSV协同作用，可能对气道炎症和高反应性的产生有重要的影响，并在一定程度上诱导RSV病毒复制和传播。因此，深入研究LPS对RSV感染小鼠气道炎症和气道高反应性的影响以及其机制，有利于深入理解RSV感染的发病机制，为预防和治疗RSV感染提供新的思路和策略。
二、研究目的
本研究的主要目的是探讨LPS对RSV感染小鼠气道炎症和气道高反应性的影响及其机制。具体研究目标包括：
1.建立RSV感染小鼠模型，评估LPS对RSV感染小鼠气道炎症和气道高反应性的影响；
2.检测LPS对RSV感染引起的肺泡上皮细胞损伤、炎症反应及细胞因子的表达等生理指标的影响；
3.研究LPS对RSV感染小鼠气道平滑肌细胞收缩及体外气道反应性的影响，评估其对气道高反应性发生的影响；
4.探究LPS与RSV作用机制，包括其对TLR4/NF-κB等信号途径的影响。
三、研究内容及技术路线
1.建立RSV感染小鼠模型：选用BALB/c小鼠进行RSV感染。将小鼠随机分为四组：正常对照组、LPS组、RSV组和LPS+RSV组，并采用不同剂量和时间的处理方式进行干预。对不同组别的小鼠进行呼吸道高反应性最大荷重值及lungsconeind的测试，评估气道炎症和高反应性的变化。
2.检测生理指标：采用实时荧光定量PCR、免疫印迹和ELISA等方法检测LPS对RSV感染引发的肺泡上皮细胞损伤、炎症反应以及细胞因子表达等重要生理指标的影响。
3.体外气道反应性实验：采用Methacholine（Mch）浓度梯度进行肺窝酶阳性（Enu）小鼠气道平滑肌细胞的体内研究。比较不同组别小鼠气道收缩反应的差异。
4.研究LPS与RSV作用机制：采用Westernblotting，免疫组化和荧光共聚焦显微镜等技术，对LPS与RSV在TLR4/NF-κB等信号途径上的作用机制进行深入研究。
预计完成时间及研究经费：
本研究计划历时两年完成，经费预算为80万元。其中包括实验室设备购置、耗材费用、人员工资和差旅费等。