新型生物相容性纳米微球的制备及其siRNA递送效率的研究的开题报告.docx

新型生物相容性纳米微球的制备及其siRNA递送效率的研究的开题报告
一、选题背景与意义
RNA干涉技术（RNAinterference,RNAi）是一种能够启动特定基因沉默的生物分子技术，在生物医学领域中具有非常广泛的应用前景。目前，RNAi技术已经被证明对于癌症、遗传疾病、病原菌等方面治疗和防治有着非常重要的意义。然而，在这一技术的具体应用过程中，有一个比较重要的问题就是如何将RNAi技术中的siRNA能够有效地送达到细胞内部以实现沉默特定的基因。
针对这个问题，纳米技术已经成为目前最为有效、高效且安全的递送siRNA的手段之一。纳米检控制来的纳米微粒具有大小可控、存储容易、空间可控等特点，因此可以在生物分子领域中得到广泛的应用。此外，生物相容性是保证纳米微粒在体内稳定性和安全性的关键要素。因此，本文将针对这些要素展开研究，以期制备出一种具有优异生物相容性的纳米微球，并验证其在siRNA递送方面的疗效，为以后RNAi技术的进一步应用奠定基础。
二、实验设计
1.合成一种具有生物相容性的纳米微球
采用较为广泛应用的‘凝胶胶束溶剂挥发法’，通过聚合反应得到具有生物相容性的聚合物，制备纳米微球。
2.利用AFM对纳米微球的形态特征和尺寸进行表征
采用AFM对制备出的纳米微球的形态特征和尺寸进行表征，以确保纳米微球是均匀的球形。同时，采用TEM对其进一步表征。
3.测定pH值、离子强度对纳米微球稳定性的影响
利用量子点和Zetasizer测定不同pH值、不同离子强度条件下，纳米微球的稳定性，确定其最适pH和最适离子浓度。
4.测试纳米微球对细胞的毒性
采用MTT法对制备出的纳米微球对HEK293细胞的毒性进行评价，以评定其生物相容性是否达到要求，具有递送siRNA的潜力。
5.测试纳米微球载荷siRNA的递送效率
在pH值和离子浓度最优条件下，尝试将特定基因的siRNA载入制备出的纳米微球内，对HEK293细胞进行转染，进而检测基因沉默程度，确定纳米微球递送siRNA的效率。
三、预期结果和研究意义
在研究的过程中，我们期望能够成功地合成出一种具有良好生物相容性的纳米微球，并确定其适宜的pH和离子浓度下的稳定性。同时通过MTT法判断纳米微球对细胞的毒性，进一步为其在siRNA递送中的应用提供安全性。最终，我们将在细胞中检测纳米微球对siRNA的递送效率，为RNAi技术在细胞内特定基因沉默方面的应用提供新的技术攻关，为RNAi技术的基础研究做出探索性的尝试。