柳枝稷Pvi-miR319基因及其靶基因PvPCF5的克隆与功能研究的开题报告.docx

柳枝稷Pvi-miR319基因及其靶基因PvPCF5的克隆与功能研究的开题报告
一、研究背景与研究意义
柳枝稷（PanicumvirgatumL.）是一种重要的能源作物，具有生长快、适应性强、生物量高等优点，在生物质制备、发电、生物燃料等方面有广泛的应用前景。研究柳枝稷的生长发育和分子机制，对促进其种植与开发有着积极的作用。
miRNA是重要的一类非编码RNA，在生物体内调控基因表达过程中扮演着主导，同时也是柳枝稷分子机制研究中的重要内容。miR319是一类较为保守的miRNA，在调控植物的生长发育中具有重要的生理和生化功能。在公开数据库中已经有关于miR319的信息，但是在柳枝稷中目前还缺少相关研究。因此，研究柳枝稷中miR319的基因克隆、调控机制及其靶基因PvPCF5等生物学特性具有理论和应用意义。
二、研究内容与方法
1.miR319基因的克隆
通过PCR扩增鉴定柳枝稷RNA后，进行RNA样品的筛选，挑选靶基因PvPCF5稳定且清晰的区域制备cDNA。从cDNA中筛选目标基因miR319靶区域，扩增得到目标miR319基因；
2.miR319的表达模式和调控方式研究
使用RNAgelblot和Real-timePCR测定目标miR319基因在柳枝稷不同部位及不同发育阶段的表达模式，初步了解miR319的表达模式及其调控方式；
3.PvPCF5的克隆和鉴定
从柳枝稷中筛选出目标基因PvPCF5，按照其序列设计相应引物克隆并鉴定，初步了解PvPCF5的生物学特性；
4.targetingPM319-miRNA对柳枝稷生长发育的调控作用初步研究
将miR319及其靶基因PvPCF5的信息核酸转化为RNAi表达载体，转化至柳枝稷中，进行转化后的柳枝稷植株的生长发育观测及基因的表达测定；
三、预期结果
本研究通过miR319基因的克隆并初步了解其表达模式和调控方式，鉴定了靶基因PvPCF5及初步了解其生物学特性，并探究了targetingPM319-miRNA对柳枝稷生长发育的调控作用，为揭示柳枝稷生长发育与分子调控机制提供初步信息。
四、研究意义
该研究对揭示柳枝稷生长发育与分子调控机制，为柳枝稷高效种植和开发利用提供了重要的理论依据和实验信息，同时也有助于增强人们对普通大众生物学研究的认识和了解。