重组人胱抑素C重链单域抗体的制备及初步应用的开题报告.docx

重组人胱抑素C重链单域抗体的制备及初步应用的开题报告
一、研究背景
人胱抑素C(humancystatinC,hCC)是一种单链的酸性半胱氨酸蛋白酶抑制剂，广泛存在于人体各种细胞中，是一种重要的肾功能指标。目前，常规检测hCC通常采用酶联免疫吸附法(ELISA)，然而，这种方法存在的问题是需要多次操作，费时费力，而另一种快速检测方法是利用一种抗hCC的单克隆抗体，但是单克隆抗体的制备需要经过较长的时间和高昂的成本。
而单域抗体最早由鲍尔和法巴提出的，是指通过剪切酶作用分离抗体轻及重链后，再重组成一个由重链上的一个或几个组成的抗体。这样制备的单域抗体具有分子量小、易表达、受体结合力高、易于修饰等优点，在肿瘤治疗、疾病诊断等领域有广泛的应用前景。
因此，本文旨在研究并制备出一种针对hCC的单域抗体，并初步探究其在hCC的检测中的应用价值。
二、研究内容及方法
1.重组hCC单域抗体的制备
以hCC为抗原，通过聚合酶链式反应(PCR)克隆出轻链和重链的基因。采用原核表达系统表达并纯化出单域抗体，并通过Westernblot等方法进行鉴定。
2.单域抗体的活性分析
采用表面等离子共振仪(Biacore)对制备出来的单域抗体进行活性分析，测定其与hCC的亲和力和结合力。
3.单域抗体的应用研究
将制备出来的单域抗体应用于hCC的检测中，与ELISA方法进行对比，观察其检测灵敏度和特异性。
三、预期结果及意义
预计通过以上方法成功制备出一种针对hCC的单域抗体，并证明其与hCC结合的亲和力和特异性较高，可以用于快速、准确地检测hCC的水平。这对于肾功能的评估和临床检测具有广泛的意义，也有助于单域抗体在疾病诊断领域的应用推广。