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小鼠肝脏Cdc42敲除导致肝癌发生发展的作用与机制研究的任务书
任务书
项目名称：小鼠肝脏Cdc42敲除导致肝癌发生发展的作用与机制研究
研究内容：
Cdc42是细胞质骨架蛋白家族的一个成员，广泛参与细胞增殖、迁移、分化和形态改变等生物学过程，与多种肿瘤发生发展密切相关。前期研究发现，在某些肝癌患者中Cdc42蛋白的表达量明显升高，可见其与肝癌发生发展相关。本项目旨在通过小鼠肝脏Cdc42基因敲除的方式，进一步探究Cdc42在肝癌发生发展过程中的作用及机制。
具体内容：
1.建立小鼠肝脏Cdc42敲除模型
选择CRE-Loxp系统建立小鼠肝脏Cdc42基因敲除模型。将Cdc42基因的Loxp位点插入小鼠的Cdc42基因位点上，同时在其体内引入具有Cre酶活性的质粒，使Loxp位点被Cre酶剪切，Cdc42基因从而被敲除。通过PCR、Westernblot等方法鉴定小鼠肝脏Cdc42基因敲除模型的建立情况。
2.观察小鼠肝脏发生癌变的情况
采用镜下检查、病理学鉴定等方法观察Cdc42敲除小鼠肝脏是否会出现癌变。对于出现癌变的样本进行RNA-seq等高通量测序分析，挖掘与Cdc42敲除相关的信号通路和基因，为后续机制研究提供线索。
3.探究Cdc42调控的细胞信号通路变化
根据RNA-seq结果，筛选出与Cdc42调控相关的基因，并进一步验证其表达情况。利用一些相关信号通路抑制剂、释放剂等，探究Cdc42可能调控的细胞信号通路变化，如Wnt、ERK、JNK等信号通路。
4.通过体外实验佐证Cdc42调控的机制
应用体外细胞培养等方法，利用Cdc42敲除小鼠和野生型小鼠的肝癌细胞系，观察对于肿瘤细胞增殖、侵袭、凋亡等的影响。通过Westernblot、免疫细胞化学法等方法，检测相关蛋白的表达、修饰等变化，确认Cdc42调控相关蛋白在肝癌中的作用和机制。
研究意义和贡献：
本项目的研究可深化对Cdc42与肝癌发生发展之间关系的理解，为肝癌生物学研究提供新的思路和方向。同时，对于Cdc42在肝癌中的具体作用和作用机制的研究，有助于探索肝癌疾病的发生机制，为肝癌治疗提供新的策略和手段。