益生菌调控RNA m6A甲基化改善动物肠炎机制的研究的任务书.docx

益生菌调控RNAm6A甲基化改善动物肠炎机制的研究的任务书
一、研究背景
随着生活水平的提高和饮食结构的改变，肠道疾病已逐渐成为一种常见的慢性疾病，如炎症性肠病（IBD）、肠道感染、肠易激综合症等。研究显示，人体肠道中菌群种类繁多，其中极少数细菌、真菌和病毒可以引起肠道炎症。益生菌是人体肠道内的一种微生物菌群，其有助于维持人体的健康和防止肠道炎症。然而，益生菌对肠道炎症的作用机制尚不明确。RNA甲基化作为一种新的表观调控机制，可以通过改变转录后修饰的RNA稳定性、转录因子结合能力、转录速度、mRNA的核糖体识别等方式问调控基因的表达水平，参与多种细胞和疾病的发生和发展。其主要表现为m6A甲基化，即N6-甲基腺嘌呤。近年来，研究发现，m6A甲基化在许多肿瘤、病毒感染以及自身免疫性疾病等疾病中发挥了重要作用，但在肠道疾病中的作用却很少被探究。因此，本研究拟以益生菌为研究对象，应用m6A甲基化技术，探究益生菌与肠炎之间的关系和机制，为深入理解益生菌预防肠道疾病提供参考和依据。
二、研究目的
本研究旨在探究益生菌对肠炎的调控机制和与m6A甲基化的关系，重点研究一下问题：
1.益生菌在肠炎治疗中的作用及其机制。
2.益生菌调控m6A甲基化在肠炎治疗中的机制。
3.益生菌对RNA转录后修饰的影响及其对肠炎治疗的作用。
三、研究内容
1.鉴定对肠炎具有潜在作用的益生菌株。
2.建立动物模型，考察益生菌在肠炎治疗中的效果。
3.通过转录组和N6-MethyladenosineSequencing（MeRIP-seq）等技术，研究益生菌调控m6A甲基化的机制。
4.进一步研究益生菌对RNA转录后修饰的影响，包括对基因表达的影响和对mRNA的m6A甲基化的影响。
5.对研究结论进行统计分析和研究报告撰写。
四、研究方法
1.实验材料
（1）肠炎发病模型动物（大鼠或小鼠）。
（2）益生菌菌株。
（3）m6A甲基化抗体、蛋白质组学分析仪等实验设备。
2.筛选益生菌菌株和建立肠炎模型
（1）筛选益生菌菌株：将多种益生菌菌株接种到培养基中，通过不同的技术筛选得到具有对肠炎预防或治疗作用的菌株。
（2）建立肠炎模型：将动物分为肠炎组和正常对照组，通过不同的技术方法（如环磷酰胺、抗生素等）诱导肠炎，研究益生菌在其中的作用。
3.RNA提取及转录组分析
（1）提取RNA：从不同组动物的肠道组织样品中提取RNA。
（2）建立转录组文库：利用IlluminaHiSeq4000/Novaseq6000建立转录组文库。
（3）测序和数据分析：对转录组文库进行测序，并对测序数据进行几何归一化、差异表达基因筛选、分类分析等分析。
4.益生菌调控m6A甲基化的机制
（1）MeRIP-seq检测:MeRIP-seq测序技术检测益生菌菌株对RNA的m6A甲基化水平和在肠炎的调控作用。
（2）Westernblot:对研究中的蛋白质进行Westernblot分析，进一步研究m6A甲基化的调控作用。
5.m6ARNA甲基化水平分析及对激素的反应
（1）MeRIP-qPCR：对m6A甲基化水平升高的靶基因进行验证，进一步研究其对肠炎的调控作用。
（2）Enzyme-LinkedImmunosorbentAssay（ELISA）：对不同组肠炎动物中相关激素进行检测。
六、研究意义
1.本研究能够明确益生菌对肠炎的调控机制，为深入认识肠道菌群与肠道健康之间的关系提供重要的参考和依据。
2.本研究有助于揭示m6ARNA甲基化在肠炎中的作用，为RNA修饰研究领域提供新思路和新方法。
3.本研究结果对益生菌的选用和肠炎的预防和治疗提供了理论和实践依据。