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大肠杆菌利用脂肪酸进行β--丙氨酸合成的代谢工程改造的任务书 任务书 题目:大肠杆菌利用脂肪酸进行β-丙氨酸合成的代谢工程改造 研究背景: β-丙氨酸是一种重要的氨基酸,广泛应用于医药、农业、化工等领域。传统的β-丙氨酸制备工艺,一般采用化石燃料等人工合成原料,存在成本高、资源紧张等缺陷。因此,寻找新的β-丙氨酸生产途径,成为当前研究的热点之一。 大肠杆菌是一种常见的微生物,它可以利用多种天然产物和富集的废弃物作为碳源和能源,可用于生产多种合成物。同时,脂肪酸及其衍生物在生物化学和生物医药领域中具有广泛应用前景。因此,利用大肠杆菌代谢工程改造实现β-丙氨酸的合成,具有生产成本低廉、环节简单、高效节能的优势。 任务目标: 本次任务旨在利用大肠杆菌代谢工程改造,通过利用脂肪酸进行β-丙氨酸合成,打破传统工艺生产β-丙氨酸的瓶颈。任务本着提高β-丙氨酸的生产效率、减少生产成本、降低对环境污染等方面的要求,通过以下方面进行探究和调控: 1.探究利用脂肪酸作为碳源能够促进大肠杆菌合成β-丙氨酸的生产效率,并确定最优质量和浓度的碳源。 2.调控关键酶活性,优化β-丙氨酸生产代谢途径。通过对甘油三酯酶、乙酰辅酶A羧化酶、β-丙氨酸合成酶等关键酶活性的调控,提高生产β-丙氨酸的效率。 3.调整菌株代谢网络,提高β-丙氨酸的产量。通过代谢工程改造,调整代谢途径,优化脂肪酸的代谢过程,增加β-丙氨酸在合成过程中的净产量和合成速度。 4.利用遗传工程手段,在菌株中引入外源基因,增强代谢活力和合成效率。通过转入包括β-丙氨酸合成酶等外源基因,增强脂肪酸代谢活力,提高β-丙氨酸的产量和合成速度。 任务步骤: 1.确定大肠杆菌作为研究对象,设计实验流程。 2.探究脂肪酸作为碳源对β-丙氨酸的影响,筛选脂肪酸种类和浓度,寻找最优条件。 3.调节带有β-丙氨酸合成途径关键酶基因的表达,确定适宜的酶活性水平运用反向代谢工程方法。 4.优化脂肪酸代谢途径,调整大肠杆菌代谢网络,增强代谢活力和效率,提高β-丙氨酸的净产量和合成速度。 5.引入包括β-丙氨酸合成酶等外源基因,增强菌株代谢能力,提高β-丙氨酸的产量和合成速度。 6.对比并分析β-丙氨酸生产周期,产量和成本变化,评估代谢工程改造的效果,并进一步完善改造方案。 7.总结实验结果,撰写实验报告。 任务成果: 完成本任务的目标后,期望获得以下成果: 1.通过代谢工程改造,实现大肠杆菌脂肪酸合成β-丙氨酸,从而提高β-丙氨酸的生产效率、成本低、减少环境污染等优势。 2.探究和优化脂肪酸代谢途径,调节代谢网络,寻找最优条件,提高β-丙氨酸的净产量和合成速度。 3.引入外源基因,增强代谢能力,提高β-丙氨酸的产量和合成速度。 4.基于实验结果,对β-丙氨酸生产周期、产量和成本变化进行对比和分析,及时评估代谢工程改造的效果,并进一步完善改造方案。 5.撰写实验报告,对本任务的研究过程和结果进行系统的总结和阐述。 参考文献: 1.BoenischMJ,etal.MetabolicengineeringofEscherichiacolifortheproductionofalpha-ketoisovaleratefromglucose[J].ApplMicrobiolBiotechnol,2014,98(13):5843-5852. 2.JeddMR,etal.ConstructionandcharacterizationofabioluminescentEscherichiacoliK-12strainforuseinhigh-throughputscreeningformutagenicagents[J].EnvironToxicol,2014,29(11):1364-1368. 3.JiaB,etal.Constructionofaxylose-utilizingEscherichiacolistrainbyone-stepintegrationofxyloseutilizationpathwayintothegenomeanditsapplicationasaplatformforaminoacidproduction[J].ApplMicrobiolBiotechnol,2016,100(15):6835-6845. 4.LeeJH,etal.Directconversionofalgalbiomasstobiofuels[J].Energies,2016,9(1):10-23. 5.MiL,etal.MetabolicengineeringofEscherichiacoliforenhancedproductionofα-ketoglutarate[J].ApplMicrobiolBiotechnol,201