骨髓间充质干细胞立体定向移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究的任务书.docx

骨髓间充质干细胞立体定向移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究的任务书
一、课题背景和意义
脑缺血是指大脑动脉发生粥样硬化、血栓形成、栓塞或动脉痉挛等因素所致的脑血管疾病。其特点为缺血、缺氧和代谢障碍，导致神经细胞死亡和功能受损。纵观全球，脑卒中是导致死亡和残疾的主要原因之一。针对脑缺血再灌注损伤的治疗手段有限，目前临床采用的治疗手段主要是常规药物处理以及物理治疗等，这些方法都有其局限性，对于完全或严重的神经功能损害效果不佳。
在众多的治疗手段之中，干细胞立体定向移植是近年来备受关注的新兴治疗手段之一。骨髓间充质干细胞（mesenchymalstromalcells，MSCs）是一种能够分化为多种细胞类型的成体干细胞，已经在临床上广泛应用于治疗多种疾病。当前研究表明，骨髓间充质干细胞对于神经细胞修复和保护具有显著的作用。而立体定向移植则能够大大提高生物活性剂的定位精度和治疗效果。因此，本研究选择骨髓间充质干细胞立体定向移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤模型，研究其疗效和机制，为进一步探索脑缺血再灌注损伤治疗提供新思路。
二、研究目的
1.构建大鼠脑缺血再灌注损伤模型，并评估其损伤程度；
2.评估骨髓间充质干细胞立体定向移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的疗效；
3.研究骨髓间充质干细胞立体定向移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的机制。
三、研究内容
1.构建大鼠脑缺血再灌注损伤模型。采用经颅窗法在大鼠颅骨上制作窗口，并将左前动脉分别梳理和结扎，再移除结扎，模拟脑缺血再灌注损伤过程。观测大鼠神经功能变化及脑组织病理学变化。
2.骨髓间充质干细胞的提取和鉴定。利用Ficoll-Paque离心法分离出骨髓间充质干细胞，并通过面积测定、多能性分化实验等方法验证干细胞提取情况。
3.骨髓间充质干细胞立体定向移植。将大鼠分为模型组、人血清注射治疗组以及骨髓间充质干细胞移植组，研究不同治疗方法的临床效果，并通过PET和CT等技术进行立体定向移植操作。
4.评估骨髓间充质干细胞立体定向移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的疗效。采用Morris水迷宫测试、免疫组化、RT-PCR等方法，评估治疗效果，并对其产生的机制进行分析。
四、研究方案
1.实验动物：
选择120只体质健康、无疾病大鼠，随机分成模型组、人血清注射治疗组以及骨髓间充质干细胞移植组，每组40只；雌、雄性动物各半。
2.实验设计：
A.模型组：大鼠经过手术模拟脑缺血再灌注损伤，不进行治疗；
B.人血清注射治疗组：36小时内注射人体血清100ml、静脉注射头孢呋辛100mg，治疗14天；
C.骨髓间充质干细胞移植治疗组：进行了脑缺血再灌注损伤模拟手术后，立即进行骨髓间充质干细胞立体定向移植治疗，治疗14天。
3.实验方法：
A.骨髓间充质干细胞的提取和鉴定：实验室是否具备干细胞提取的条件，鉴定MSC的来源、表面标志物、生物学功能等。
B.构建大鼠脑缺血再灌注损伤模型：大鼠药物麻醉，压迫颅皮肤，切开颅骨、翻开大致车瓣，显露出大脑皮层。通过锯去左侧枕骨钻孔作为窗口，并通过结扎左前动脉、再移除结扎，模拟脑缺血再灌注损伤过程。
C.骨髓间充质干细胞立体定向移植治疗：通过PET和CT技术进行立体定位，骨髓间充质干细胞移植到损伤处。
D.评估骨髓间充质干细胞立体定向移植治疗效果：Morris水迷宫测试、免疫组化、RT-PCR等方法，评估治疗效果，并对其产生的机制进行分析。
五、经费预算
本课题总共需要经费人民币XXXX元，包括以下方面：
1.实验动物的购买和养护费用：XXX元。
2.研究材料的购买费用：XXX元。
3.实验室使用费和设备折旧费用：XXX元。
4.研究人员工资和场地使用费：XXX元。
5.其它支出：XXX元。
六、研究预期成果
1.构建起一套大鼠脑缺血再灌注损伤模型，并评估其损伤程度。
2.提取和鉴定出大量的骨髓间充质干细胞，并成功移植到治疗大鼠身上。
3.对骨髓间充质干细胞立体定向移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的疗效进行评估并进行机制研究。
4.为探索脑缺血再灌注损伤的治疗提供新思路。