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腺苷诱导肝癌BEL-7404细胞凋亡的分子机制研究的任务书
任务书
一、研究背景
肝癌是目前世界上最常见和最具有致死性的恶性肿瘤之一。据统计，全球每年约有70万人死于肝癌，其中大多数在中国。传统的治疗手段如化疗、放疗、手术等都存在一定的局限性和副作用，因此寻求更为有效和安全的治疗方法是迫切的需求。
研究显示，腺苷作为一种内源性化合物，具有很多生理和药理学作用。其中最显著的就是对肿瘤的抑制作用。早期研究表明，腺苷可以通过诱导细胞凋亡的途径来抑制肝癌细胞，但其具体的分子机制尚未完全明确。因此，本研究拟采用BEL-7404细胞株作为模型，研究腺苷诱导肝癌细胞凋亡的分子机制，并探寻其潜在的治疗意义。
二、研究内容
1.筛选腺苷的浓度和处理时间，确定适宜的实验条件；
2.采用MTT法测定不同浓度腺苷对BEL-7404细胞增殖的影响；
3.采用DAP1和Caspase3蛋白的Westernblotting检测腺苷是否可以诱导BEL-7404细胞凋亡；
4.检测腺苷是否可以调节凋亡相关分子表达，如p53，Bcl-2、Mcl-1等；
5.探究腺苷所诱导的细胞凋亡是否与ROS的生成有关；
6.探究腺苷所调节的凋亡蛋白是否与MAPK信号通路有关。
三、研究方法
1.细胞培养：采用BEL-7404人肝癌细胞株进行培养；
2.浓度筛选：选择不同浓度的腺苷(0mM，0.01mM，0.1mM，1mM，10mM，50mM)处理细胞，经MTT法进行细胞的增殖及存活率的测定，筛选出适宜的浓度；
3.实验组设计：分别设置对照组、低剂量组、高剂量组和处理时间组，每组分别测定细胞存活率及Westernblotting实验；
4.Westernblotting:抽提细胞蛋白并进行SDS-PAGE电泳，转膜，用抗体进行检测；
5.其他方法：包括荧光染色及流式细胞术等。
四、预期结果
预期通过本研究，可以明确腺苷作为一种内源性化合物在肝癌治疗中的潜在作用机制，并为临床的治疗提供新的思路和指导，推动临床的个性化治疗和减少化疗等传统治疗手段的副作用。
五、研究意义
本研究对于深入认识肝癌发生、进展、治疗机制具有重要意义。一方面，研究结果可以为腺苷作为一种新型治疗手段的临床前和临床研究提供新的桥梁，对探索肝癌的细胞分子机制以及发现新的治疗靶点具有重大意义；另一方面，该研究对于指导肝癌的个性化治疗和促进现有治疗手段的改进和提高有着深远的意义。
六、进度安排
本研究计划开展一年时间，具体进度安排如下：
第一季度：文献调研，制定实验方案；
第二季度：细胞培养和处理腺苷。进行细胞增殖和存活率实验；
第三季度：Westernblotting实验；
第四季度：数据的分析和总结以及结论的撰写。
七、参考文献
1.S.Stangl,M.F.Gruber,R.Richtig,etal.,Adenosineinducesapoptosisinhumanlivertumorcellsinvitro.JournalofHepatology,2003,39(5):703-710.
2.S.Kurkjian,S.Stoeger,A.Hill-Kapturczak,etal.,A2Aadenosinereceptoractivationinhibitshepatocytegrowthfactor(HGF)-inducedangiogenesis.AmericanJournalofPathology,2008,172(3):749-758.
3.N.Koukourakis,S.Kouroupi,K.Manoledaki,etal.,P53regulationandfunctioninHepatitisCVirus-associatedhepatocellularcarcinoma.WorldJournalofGastroenterology,2012,18(43):6185-6198.
4.R.A.Plummer,L.C.McKinney,G.C.Harris,etal.,Bcl-2overexpressioninhibitsprogressionofhepatocellularcarcinomabyblockingAkt.JournaloftheNationalCancerInstitute,2002,94(22):1704-1713.