沙眼衣原体感染后HeLa-229细胞的miRNA差异表达及其功能研究的任务书.docx

沙眼衣原体感染后HeLa-229细胞的miRNA差异表达及其功能研究的任务书
任务书：
一、研究背景
沙眼是一种由衣原体感染引起的眼部疾病，全球范围内都有流行，尤其在发展中国家和贫困地区更为严重。沙眼病原体主要是沙眼衣原体，进入人体后引起眼结膜炎和角膜炎。HeLa-229细胞是从一个人类子宫颈癌中分离出的人体癌细胞株，广泛应用于生物学和医学研究。近年来，研究人员发现沙眼衣原体感染会改变宿主细胞的基因表达和miRNA表达，但其中的机制尚不明确。因此，本研究旨在通过miRNA差异表达的分析来探讨沙眼衣原体感染对HeLa-229细胞miRNA表达的影响及其功能，为沙眼的防治提供理论基础。
二、研究内容
1.建立HeLa-229细胞沙眼衣原体感染模型。
2.分离沙眼衣原体感染HeLa-229细胞和未感染HeLa-229细胞，提取miRNA。
3.测定沙眼衣原体感染HeLa-229细胞和未感染HeLa-229细胞miRNA的差异表达，并进行生物信息学分析。
4.验证miRNA差异表达结果，通过qRT-PCR检测miRNA的表达变化。
5.使用不同生物信息学工具分析差异表达miRNA的功能，预测其潜在的靶点和通路。
6.确定差异表达miRNA对HeLa-229细胞生长、增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响。
三、研究意义
通过对沙眼衣原体感染HeLa-229细胞和未感染HeLa-229细胞miRNA的差异表达及其功能研究，可以为沙眼病的防治提供新的理论基础。此外，本研究对于理解衣原体感染引起的细胞功能及其对宿主的影响，以及HeLa-229细胞生物学特性等方面也具有一定的参考价值。
四、研究方法
1.建立HeLa-229细胞沙眼衣原体感染模型：将沙眼衣原体接种到HeLa-229细胞培养基中，通过光学显微镜和PCR方法检测沙眼衣原体的感染情况。
2.提取miRNA：使用mirVanamiRNA分离试剂盒提取HeLa-229细胞和沙眼衣原体感染HeLa-229细胞的总RNA，平衡质量和数量，纯化miRNA。
3.测定miRNA的差异表达：使用miRNA芯片或RNA高通量测序技术（RNA-Seq）对miRNA进行全面分析，并对差异表达的miRNA进行生物信息学分析。
4.验证差异表达miRNA的表达变化：使用qRT-PCR检测差异表达miRNA的表达水平变化。
5.分析差异表达miRNA的功能：使用不同的生物信息学工具预测差异表达miRNA的靶点和通路，并分析其功能。
6.确定差异表达miRNA对细胞生物学行为的影响：通过细胞实验方法，如MTT实验、划痕愈合实验、Transwell实验等，确定差异表达miRNA对HeLa-229细胞生长、增殖、迁移、侵袭等生物学行为的影响。
五、输出成果
1.撰写一篇50,000字左右的博士研究论文，结合实验结果对沙眼的防治提出建议。
2.参加国内外学术会议和学术交流，展示和讨论研究成果，提升国际竞争力和学术影响力。
3.在高水平期刊上发表论文，至少1篇SCI收录论文。
4.制作并提交相关实验数据和全面的研究报告。
六、时间安排
本研究计划共需3年时间。分别为：
第一年：建立沙眼衣原体感染HeLa-229细胞模型，提取miRNA并测定差异表达，验证差异表达miRNA的表达变化。
第二年：分析差异表达miRNA的功能及其对细胞生物学行为的影响，并对研究结果进行整理和分析。
第三年：完成研究论文的撰写和提交，并参加学术会议和交流活动。