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拟南芥转录因子SPL9核定位信号功能研究的任务书
一、任务背景
植物是地球上非常重要的生物种类，对于维持生态平衡和人类的生存起着至关重要的作用。植物发育过程中各种转录因子都扮演着不同的角色，控制植物的生长和生殖。拟南芥（Arabidopsisthaliana）作为模式植物，被广泛用于植物分子生物学和生物技术的研究中。
SPL9是拟南芥中一种转录因子，它可以调控植物发育过程中各个时期的不同基因的表达，并且被发现在植物的干细胞区域中具有重要的作用。SPL9在植物发育过程中的功能尚不清楚，因此本次任务的目的就是研究SPL9在植物发育过程中的作用及其核定位信号的功能。
二、任务内容
1.SPL9在拟南芥干细胞区域的分布情况
使用分子生物学技术，定量检测SPL9在拟南芥干细胞区域的表达情况，包括转录水平和蛋白质水平，并结合细胞荧光标记技术，观察SPL9在拟南芥中的分布情况。
2.SPL9与其他转录因子的相互作用
利用蛋白质-DNA相互作用的技术，在体外和体内研究SPL9与其他转录因子在DNA上的相互作用情况，包括SPL9与DNA形成的复合物的稳定性及其在DNA上的定位情况。
3.SPL9与基因转录的调控
通过对SPL9与其他转录因子相互作用的研究，分析其调控基因转录的机制。利用ChIP-seq技术，全基因组测序技术，分析SPL9对某些基因区域的亲和作用，以及SPL9与其他转录因子合作调控转录的情况。
4.SPL9核定位信号的功能研究
SPL9能够定位到拟南芥中的细胞核区域中，并调控基因的表达。本项目旨在研究SPL9定位到细胞核中的原因，并找出其定位信号所在的位置和功能。通过利用CRISPR/Cas9技术，定点缺失SPL9蛋白的核定位信号，对缺失后的SPL9功能变化进行研究。
三、预期成果
1.建立拟南芥中SPL9的功能模型，解析其在植物发育过程中的作用。
2.揭示SPL9与其他转录因子在DNA上的相互作用方法，提供新的技术手段和理论依据。
3.明确SPL9与基因转录调控的机制，为植物基因的研究提供新的思路和方法。
4.验证SPL9核定位信号的功能，为植物分子生物学的研究提供新的突破口。
四、研究方法
1.分子生物学技术：包括基因克隆、RT-PCR、Westernblot、蛋白表达纯化技术等。
2.细胞荧光标记技术：包括分子标记细胞染色和激光共聚焦显微镜技术。
3.蛋白质-DNA相互作用研究方法：包括原子力显微镜技术、电泳迁移实验、核糖体越南技术等。
4.全基因组测序技术：包括ChIP-seq技术、RNA-seq技术、geneontology（GO）分析等。
5.CRISPR/Cas9技术实现SPL9核定位信号定点缺失。
五、参考文献
1.Sun,X.,Liu,D.,Zhang,X.,Li,M.,&Zhai,Y.(2018).SPL9(SQUAMOSAPROMOTERBINDINGPROTEIN-LIKE9)positivelyregulateslignanbiosynthesisinLinumusitatissimum.JournalofExperimentalBotany,69(16),3935-3945.
2.Li,S.,Wang,W.,Gao,J.,Yin,K.,Chen,M.,Lan,H.,&Zhang,S.(2016).SPL9andmiR156-targetedSPLgenesredundantlyregulateArabidopsisgynoeciumdifferentialpatterning.PlantJournal,89(3),488-499.
3.Xing,F.,Dong,L.,&Wang,C.(2019).SPL9positivelyregulatesanthocyaninbiosynthesisinSalviamiltiorrhiza.Molecules,24(13),2352.
4.Wu,M.F.,Tian,Q.,&Reed,J.W.(2006).ArabidopsismicroRNA167controlspatternsofARF6andARF8expression,andregulatesbothfemaleandmalereproduction.Development,133,4211–4218.
5.Laubinger,S.,Zeller,G.,Henz,S.R.,Sachsenberg,T.,Widmer,C.K.,Naouar,N.,etal.(2010).At-TAX:awholegenometilingarrayresourcefordevelopmentalexpressionanalysisandtranscriptidentificationinArabidopsisthaliana.G