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肝星状细胞通过AKT信号通路促进小鼠肝癌细胞增殖的任务书
一、研究背景
肝癌是人类健康问题的重要组成部分，为世界各地的人群带来沉重的负担。据统计，全球每年发生的新诊断肝癌病例约有84万例，死亡人数达到77万人。而在中国，肝癌的发病率和死亡率更是高居不下，给国家的健康事业和经济发展带来了极大的影响。肝癌的发病机制复杂，涉及多种细胞信号通路和分子调控网络的参与。研究肝癌发生、发展的分子机制是防治肝癌的关键之一。
肝星状细胞是肝脏的重要成分之一，具有免疫调节和脂质代谢的功能，在肝癌的发生和发展中起着重要的作用。前期研究表明，肝星状细胞可以通过激活AKT信号通路来促进小鼠肝癌细胞的增殖。AKT信号通路作为一种广泛参与细胞增殖、存活和分化的信号传导通路，在多种肿瘤的发生和发展中发挥着重要的作用。然而，目前对于肝星状细胞通过AKT信号通路促进小鼠肝癌细胞增殖的作用机制缺乏深入的了解。因此，本研究旨在深入探究AKT信号通路在肝星状细胞促进小鼠肝癌细胞增殖过程中的作用机制，为肝癌的防治提供理论依据和重要参考。
二、研究目的
本研究旨在探究肝星状细胞通过AKT信号通路促进小鼠肝癌细胞增殖的作用机制。通过以下具体目标实现：
1.筛选合适的小鼠肝癌细胞株作为研究对象。
2.采用肝星状细胞和小鼠肝癌细胞共培养，通过增殖实验和MTT检测肝星状细胞对小鼠肝癌细胞增殖的影响。
3.使用Westernblotting技术检测AKT信号通路相关蛋白的表达水平。
4.通过分析肝星状细胞释放的细胞因子对小鼠肝癌细胞增殖的影响以及AKT信号通路的激活情况探究AKT信号通路促进小鼠肝癌细胞增殖的作用机制。
三、研究方法
1.实验材料
使用C57BL/6小鼠肝癌细胞株Hepa1-6作为研究对象。肝星状细胞将从C57BL/6小鼠胶原酶/十四号核素工业用植入小鼠体内收获，使用MACS细胞分选技术进行分选。增殖实验和MTT检测肝星状细胞对小鼠肝癌细胞增殖的影响，采用96孔板，每孔加入200μl构成培养基混合物包含小鼠肝癌细胞和不同载量的肝星状细胞，制备4个不同的组。Westernblotting技术检测AKT信号通路相关蛋白的表达水平，使用蛋白抽提工具进行蛋白抽提，使用BCA反应试剂盒测定蛋白质的含量，并用SDS-PAGE电泳技术分离蛋白质。分析肝星状细胞释放的细胞因子对小鼠肝癌细胞增殖的影响以及AKT信号通路的激活情况，采用ELISA方法和Westernblotting技术进行检测。
2.研究步骤
（1）通过MTT实验检测肝星状细胞对小鼠肝癌细胞增殖的影响。
（2）使用Westernblotting技术检测AKT信号通路相关蛋白的表达水平。
（3）通过分析肝星状细胞释放的细胞因子对小鼠肝癌细胞增殖的影响以及AKT信号通路的激活情况探究AKT信号通路促进小鼠肝癌细胞增殖的作用机制。
四、研究成果
本研究预期可以得出以下结论：
1.肝星状细胞能在一定程度上促进小鼠肝癌细胞增殖，相关蛋白水平的改变可能是其中的原因之一。
2.肝星状细胞释放的细胞因子可能在肝癌细胞增殖过程中发挥了重要的作用。
3.AKT信号通路在肝星状细胞促进小鼠肝癌细胞增殖中发挥了重要的作用。
本研究成果可能对肝癌的防治提供理论依据和指导，促进相关疾病的研究和治疗。