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胰岛-骨髓间充质干细胞联合移植治疗大鼠Ⅰ型糖尿病的研究的任务书
一、研究背景及意义
糖尿病是一种全球流行的代谢性疾病，Ⅰ型糖尿病是由胰岛素细胞的自身免疫破坏引起的一种疾病。目前，Ⅰ型糖尿病的治疗难度较大，主要依靠胰岛素治疗和血糖控制。然而，长期使用胰岛素治疗可能会出现许多副作用，并且很难达到理想的治疗效果。因此，寻找新的治疗手段显得尤为重要。
干细胞具有自我更新、多向分化潜能和免疫耐受性等特点，因此被广泛应用于组织重建和治疗疾病。骨髓间充质干细胞（BMSCs）是一种常见的成体干细胞，具有较强的免疫调节和抗炎作用，已被用于治疗多种疾病。但是，单一的干细胞治疗糖尿病效果不佳。因此，结合不同类型的干细胞进行治疗可能会更有潜力。
胰岛细胞是人体内维持血糖稳态的重要细胞，胰岛细胞的数量和质量直接影响着机体的代谢状态。因此，使用干细胞联合胰岛细胞移植治疗Ⅰ型糖尿病的想法应运而生。已有研究表明，将BMSCs与胰岛细胞联合移植可显著改善Ⅰ型糖尿病患者的病情。但是，有关糖尿病模型动物中干细胞联合胰岛细胞移植的研究报道较少，其治疗效果和机制仍需深入研究。
因此，本研究拟采用胰岛-骨髓间充质干细胞联合移植治疗大鼠Ⅰ型糖尿病模型，探究治疗效果和潜在机制，进一步完善干细胞治疗糖尿病的研究。
二、研究内容及方法
2.1实验动物
本实验采用雄性SD大鼠，体重约200g，从华中农业大学动态实验动物中心购买。实验动物须符合以下要求：无疾病史，无肿瘤，无特殊疾病史，符合实验条件且适应环境。
2.2糖尿病模型建立
本实验选用链脲佐菌素（STZ）诱导建立Ⅰ型糖尿病大鼠模型。首先，将STZ按照20mg/kg的剂量通过尾静脉注射入体内，注射后立即向注射部位按摩1～2分钟。72小时后，用血糖仪检测血糖含量，检测3次，平均超过16.7mmol/L以上，即视为建立成功。
2.3免疫染色
用免疫荧光染色法检测移植患者的胰岛细胞，BMSCs的细胞表面标志和微血管数量。选择荧光标记的抗体（如抗胰岛素、抗CD90和抗CD31抗体）和染料（如荧光素和DAPI）进行染色，观察标志物和血管发育情况。
2.4细胞移植
收集健康大鼠的胰岛细胞和BMSCs，进行联合移植。胰岛细胞和BMSCs将加入培养基中，共培养48小时。然后，分别注射1000个胰岛细胞和3000个BMSCs到糖尿病大鼠的脾脏和腹腔内。
2.5结果评估
在细胞移植完成后，对大鼠进行长期的监测评估。分别进行以下评估内容：
1）血糖水平。检测血糖水平，观察移植前后血糖水平变化趋势。
2）糖化血红蛋白浓度。检测糖化血红蛋白浓度，了解糖尿病程度。
3）胰腺组织病理学分析。观察胰腺组织的损伤程度并进行评价，病理学分析胰腺中胰岛细胞数量和BMSCs数量的比例。
4）记录大鼠身体质量、食物摄入、尿量及其它症状变化等。
三、预期结果
通过本研究，我们预期可以得到以下结果：
1）BMSCs与胰岛细胞联合移植能够显著改善Ⅰ型糖尿病模型大鼠的血糖水平，且治疗效果显著优于单一胰岛细胞移植组和对照组。
2）BMSCs与胰岛细胞联合移植有助于提高受体体内胰岛细胞数量和功能，且能够抑制自身免疫反应。
3）联合移植治疗后，受体动物的胰腺组织中BMSCs数量有所增加，胰岛细胞数量相应增加，且血管形成良好。
4）本研究有望为BMSCs与胰岛细胞的联合移植提供新的理论依据，为临床治疗Ⅰ型糖尿病提供新的思路。
四、研究计划及进度安排
2个月：
1）确定研究课题，制定研究方案并完成任务书。
2）购买实验用品和药品，准备实验材料和设备，并制定实验操作流程。
3）动物实验条件的准备，并进行Ⅰ型糖尿病大鼠模型组的建立。
2-4个月：
1）进行细胞分离和移植实验，分别移植胰岛细胞和BMSCs
2）根据实验组别监测大鼠的生理指标，检测血糖、测量糖化血红蛋白等。
3）通过免疫染色和病理组织学检测方法验证实验结果。
5-6个月：
1）对实验结果进行统计学分析，绘制图表，初步评价实验结果。
2）结果分析及讨论，探讨胰岛-骨髓间充质干细胞联合移植治疗糖尿病的机制。
3）撰写毕业论文，提交论文答辩。
五、参考文献
1.SantamariaP.Thepotentialofantigen-specifictherapyforautoimmunediseases.ExpertOpinBiolTher.2002;2(6):573-85.
2.YangL,LiS,HatchH,etal.Invitrotrans-differentiationofadulthepaticstemcellsintopancreaticendocrinehormone-producingcells.ProcNatlAcadSciUSA.2002;99(12):8078-83.
3.DaveSD,VanikarAV,Pat