小鼠DND1慢病毒载体的构建及病毒生产的任务书.docx

小鼠DND1慢病毒载体的构建及病毒生产的任务书
一、任务概述
慢病毒是广泛应用于遗传学和转基因研究中的一种常用的载体。本任务旨在构建小鼠DND1基因的慢病毒载体，并生产慢病毒。该慢病毒载体将用于实验室中对小鼠DND1基因功能的研究。
二、任务内容
1.小鼠DND1基因的PCR扩增
通过PCR扩增出小鼠DND1基因的完整序列，并在PCR产物尾端加入限制性酶切位点。
2.构建慢病毒载体并质粒提取
将小鼠DND1基因克隆入慢病毒载体中，并进行限制性酶切和连接。接着进行细菌转化和质粒提取。
3.验证慢病毒载体
对质粒进行PCR验证，并进行限制性酶切和测序验证。
4.将慢病毒载体转染至293T细胞株中
将构建好的慢病毒载体通过化学方法进行转染至293T细胞株中。接着进行病毒包装和收集。
5.病毒感染和细胞稳定转染
使用获得的小鼠DND1基因慢病毒感染小鼠卵巢癌细胞株，并通过细胞筛选获取稳定表达小鼠DND1基因的细胞株。
三、任务步骤
1.设计小鼠DND1基因的引物，在小鼠基因组DNA模板上进行PCR扩增，将产物尾端加入限制性酶切位点。
2.将PCR产物和慢病毒载体克隆于文库载体质粒中，并进行连接、转化、筛选和质粒提取。
3.验证慢病毒载体，进行PCR扩增、限制性酶切和测序验证。
4.将慢病毒载体转染至293T细胞株中，进行病毒包装和收集。
5.使用获得的小鼠DND1基因慢病毒感染小鼠卵巢癌细胞株，并通过细胞筛选获取稳定表达小鼠DND1基因的细胞株。
四、实验器材和试剂
1.小鼠基因组DNA模板
2.小鼠DND1基因引物
3.PCR试剂盒
4.质粒提取试剂盒
5.限制性酶
6.T4DNA连接酶
7.大肠杆菌DH5α质粒
8.文库载体质粒
9.293T细胞
10.病毒包装试剂盒
11.小鼠卵巢癌细胞株
12.筛选试剂盒
五、安全注意事项
1.操作前应做好必要的消毒措施，保证实验台面的清洁。
2.防止PCR产物污染，加入负对照组进行验证。
3.避免接触限制性酶，使用前检查其保质期并储存于-20℃。
4.病毒包装等操作应在生物安全柜下进行。
5.操作应遵从实验室安全准则，防止实验室事故的发生。