表达大肠杆菌外膜蛋白抗原的减毒鸡伤寒沙门菌重组疫苗的构建及免疫保护研究的任务书.docx

表达大肠杆菌外膜蛋白抗原的减毒鸡伤寒沙门菌重组疫苗的构建及免疫保护研究的任务书
任务书
一、研究背景
伤寒沙门菌是一种输入性肠道致病菌，可以引起伤寒疾病，是一种重要的公共卫生问题。目前，常规的处理方法主要是使用抗生素进行治疗，但由于抗生素的滥用和过度使用导致了对抗生素的耐受性，因此开发新的防治方法变得尤为重要。利用细菌表达外膜蛋白抗原的重组疫苗，是一种既能产生免疫保护效果又可以避免使用抗生素的方法。
大肠杆菌是一种常见的微生物，具有广泛的生物学重要性。它的外膜蛋白抗原是一种独特的抗原，可以产生强烈的免疫反应。因此，将大肠杆菌的外膜蛋白基因克隆到伤寒沙门菌中，通过发酵过程将其大规模生产，可以得到一种高免疫原性的重组疫苗。
二、研究目的
本研究的主要目的是利用减毒鸡伤寒沙门菌构建表达大肠杆菌外膜蛋白抗原的重组疫苗，并对其免疫保护效果进行研究。具体目标包括：
1.构建重组表达载体，将大肠杆菌外膜蛋白基因与减毒鸡伤寒沙门菌菌株的表达载体进行连接，构建重组表达载体。
2.进行体外表达，利用大肠杆菌外膜蛋白的表达载体，将其转化到减毒鸡伤寒沙门菌中，在体外条件下表达大肠杆菌外膜蛋白抗原。
3.研究重组疫苗的免疫保护效果，将构建好的重组疫苗注射到小鼠体内，检测其是否能够产生免疫保护效果。
三、研究方法
1.构建重组表达载体，将大肠杆菌外膜蛋白基因克隆到减毒鸡伤寒沙门菌的表达载体中，利用PCR扩增方法进行基因克隆，通过酶切鉴定和测序鉴定验证重组表达载体的构建成功。
2.进行体外表达，在减毒鸡伤寒沙门菌中表达大肠杆菌外膜蛋白基因，利用SDS-PAGE电泳等方法对表达产物进行分析和提取纯化。
3.研究重组疫苗的免疫保护效果，将构建好的重组疫苗注射到小鼠体内，检测其是否能够产生免疫保护效果。通过ELISA、西方印迹等方法对免疫反应进行检测分析，并利用小鼠模型研究疫苗的免疫保护效果。
四、研究意义
本研究通过将大肠杆菌外膜蛋白抗原基因克隆到减毒鸡伤寒沙门菌中，构建了一种高免疫原性的重组疫苗，既可以有效地产生免疫保护效果，又可以避免使用抗生素的方法进行治疗。因此，具有重要的应用价值和社会价值，可以为疾病的防治提供新的思路和方法。
五、研究进度安排
1.第一阶段(第1~3个月)：基因克隆和构建表达载体，鉴定表达载体的正确性。
2.第二阶段(第4~6个月)：体外表达和纯化大肠杆菌外膜蛋白抗原，检验表达产物的纯度和质量。
3.第三阶段(第7~9个月)：小鼠免疫保护实验，检测疫苗的免疫保护效果。
4.第四阶段(第10~12个月)：数据分析和论文撰写。
六、参考文献
1.Wang,Y.,Zhu,Y.,Li,X.,Yang,Q.,Huang,J.,&Xu,N.(2017).RecombinantSalmonellatyphimuriumdisplayingtheoutermembraneproteinAofETECandtheheat-labileenterotoxinBsubunitasliveoralvaccines.Journalofmicrobiologyandbiotechnology,28(11),1870-1881.
2.Han,X.,Xiong,Y.,Wang,K.,Sun,W.,Ma,L.,Ding,L.,...&Xu,J.(2019).DevelopmentofanovelbivalentvaccineagainstpneumoniaandmeningitiscausedbyStreptococcuspneumoniaeandNeisseriameningitidisserogroupAusingthemethodofsurfacedisplaytechnology.Journalofmicrobiologyandbiotechnology,29(11),1729-1743.
3.Liu,J.,Gu,L.,Wang,X.,Yuan,J.,Zhai,S.,Chu,J.,...&Li,X.(2018).OralvaccinationwitharecombinantSalmonellavaccinevectorprovokessystemicantigen-specificCD8+Tcellpolarization:anovelstrategyforvaccinedesignandapplication.Microbialcellfactories,17(1),185.