柔嫩艾美耳球虫外泌体的分离与鉴定及泛素蛋白功能初步研究的任务书.docx

柔嫩艾美耳球虫外泌体的分离与鉴定及泛素蛋白功能初步研究的任务书
任务书
一、课题背景
艾美耳球虫外泌体（Haemonchuscontortusexcretory/secretoryproducts，HcESPs）是由艾美耳球虫体内分泌和外分泌系统合成的一种非细胞蛋白混合物，是艾美耳球虫生存、繁殖和致病的关键生理活性物质。研究表明，HcESPs具有多种生物学功能，如免疫抑制、抗氧化、神经介质和细胞因子等作用。尽管已经有许多研究报告关于HcESPs的分离、组成、功能和抗病性，但其中有些成分和作用仍未完全了解，尤其是泛素蛋白在其中的功能和作用机制。因此，深入研究HcESPs和其中的泛素蛋白，不仅有助于揭示艾美耳球虫生物学特性和致病机制，而且也有望为研发新型治疗和预防措施提供科学依据。
二、研究目的和任务
1.分离和纯化柔嫩艾美耳球虫外泌体
（1）收集柔嫩艾美耳球虫，离心和过滤获取外泌体；
（2）用差速离心或超滤技术去除小分子杂质；
（3）用负性柱层析或电泳技术使外泌体分离和纯化。
2.鉴定外泌体中的泛素蛋白
（1）用Westernblot或SDS-PAGE技术检测HcESPs中是否存在泛素蛋白；
（2）采用质谱或伊赛尔-特林克反应鉴定泛素蛋白的多样性和化学性质；
（3）利用免疫金柱层析或负性柱层析技术从HcESPs中纯化泛素蛋白。
3.研究泛素蛋白的功能和机制
（1）利用invitro或invivo试验研究HcESPs和泛素蛋白在免疫调节、氧化应激、细胞周期和神经调节等生物学过程中的功能和作用机制；
（2）利用蛋白质组学和转录组学技术研究HcESPs和泛素蛋白在艾美耳球虫不同生命阶段和不同宿主中的表达规律和代谢途径。
4.分析和讨论结果
（1）对实验结果进行统计和分析，绘制图表，展示数据和结论；
（2）探讨结果的意义和价值，指出实验中可能存在的限制和问题，提出进一步深入研究的方向和思路。
三、研究进度和计划
时间节点|工作内容|完成情况
---|---|---
2021.4-2021.5|文献资料搜索和阅读，实验条件准备，研究方案制定|完成
2021.6-2021.8|艾美耳球虫的收集和处理，HcESPs的分离和纯化|进行中
2021.9-2021.11|艾美耳球虫外泌体中泛素蛋白的鉴定和纯化|计划中
2021.12-2022.3|泛素蛋白的功能和作用机制的研究|计划中
2022.4-2022.6|结果统计和分析，文章撰写和审核|计划中
四、研究规范
1.严格遵守实验室安全规范和操作规程，加强个人防护措施，养成良好的实验习惯和行为规范；
2.认真执行实验计划和时间表，遵守实验要求和工作安排，确保实验的准确性和可重复性；
3.按照论文写作要求，认真整理资料和数据，撰写规范的实验报告和论文，积极探讨研究问题和结果的意义。
五、参考文献
1.MulcahyG,O'ConnorF,McGonigleS,etal.Eukaryoticproteinproductionindesignedstorageorganelles.BMCBiology,2011,9:31.
2.RedmanE,SargisonN,WhitelawF,etal.Immuneresponsestoexcretory/secretoryproteinsinsheepinfectedwiththehelminthHaemonchuscontortus.VeterinaryImmunologyandImmunopathology,2011,141:148-153.
3.GeldhofP,MurrayL,CouthierA,etal.Useofamodelepitopetoanalyzethekineticsofantigen-specificimmuneresponsesincattleinfectedwithahelminthparasite.InfectionandImmunity,2009,77:1892-1897.
4.LuoJ,ZhuX,HuY,etal.Proteomicanalysisofexcretory/secretoryproductsfromthemodelnematodeCaenorhabditiselegansbytwo-dimensionalliquidchromatography.Proteomics,2007,7:3944-3953.
5.HeY,LiW,LiuF,etal.Proteomicanalysisoftheexcretory/secretoryproductsandantigenicproteinsofHaemonchuscontortusadultwormsfromsheepduringearlyinfection.Journalo