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禽腺病毒血清4型重组株的构建及生物学特性研究的任务书
任务书
一、研究背景与意义
禽腺病毒（avianadenovirus）是一种广泛分布于禽类动物群体中引起传染病的病毒，其基因组为双链DNA，包裹着由三种结构蛋白组成的衣壳，病毒容易进行基因组重排，因此血清型多样，常会发生交叉感染，造成禽类生产业的严重经济损失。
禽腺病毒有四种血清型，其中1、2型病毒是禽腺病最主要的病原体，而3、4型病毒偶尔也会引起禽腺病。由于腺病毒的特性，其血清型重组与基因重组极易发生，因此研制禽腺病毒的疫苗相对复杂，而现有疫苗的保护范围并不完全，因此疫苗的更新与优化仍是禽类生产的重要课题。
针对目前疫苗产业的要求，研究人员需要更多地开发跨血清型、广谱性以及自然免疫保护覆盖范围广的疫苗抗原，同时，禽腺病毒病的防治仍需深入研究和解决。
基于上述背景和要求，研究禽腺病毒血清4型重组株并探究其生物学特性，具有十分重要的理论和实践意义。
二、研究内容
1.禽腺病毒血清4型基因的克隆和测序
从已经分离并鉴定的禽腺病毒血清4型中，提取病毒RNA/DNA，运用RT-PCR和普通PCR技术扩增病毒基因组，连接到适当的载体，并进行质粒测序分析。
2.禽腺病毒血清4型重组株的构建
运用克隆和基因重组技术，将禽腺病毒血清4型基因组转染进宿主细胞，进而实现禽腺病毒血清4型重组株的构建。重组株构建成功后，进行纯化，并进行过筛鉴定。
3.禽腺病毒血清4型重组株表达的糖蛋白结构分析
通过对禽腺病毒血清4型重组株的培养条件进行优化、纯化与提取，用不同的方法进行糖蛋白分析、MTT测定等分析手段，深入研究病毒重组株在生物组织中的表达情况，分析糖蛋白结构与表达差异，并对潜在的抗原表位展开进一步的分析。
4.禽腺病毒血清4型重组株免疫诱导的免疫反应研究
通过对禽腺病毒血清4型重组株的免疫原性进行研究，测定其免疫诱导机制与受体识别机制以及T细胞、B细胞的免疫反应等机制，分析禽腺病毒血清4型重组株在不同免疫模型中的生态与可接受性。
5.禽腺病毒血清4型重组株的生物学特性研究
通过对禽腺病毒血清4型重组株的生物学特性进行研究，探究其在不同批次、不同染料、不同纯化方式、储存温度、免疫模型等条件下的生物学特性变化与差异。
三、研究方法
1.病毒血清型的基因克隆及测序
采用限制性内切酶、DNA连接酶等方法将提取的RNA/DNA转染至载体上，获得质粒并进行质粒测序。
2.禽腺病毒血清4型重组株的构建
运用克隆与基因重组技术构建禽腺病毒血清4型重组株。
3.禽腺病毒血清4型重组株的纯化
通过超离心、柱层析等方法进行病毒的高效纯化操作。
4.糖蛋白的分析
采取要素分析、LC-MS及其他糖学分析手段，分析重组株上所表达的糖蛋白结构及表达差异。
5.禽腺病毒血清4型重组株的免疫诱导性分析
使用活细胞、胞器、转基因与其他重组蛋白对免疫反应进行测定，分析免疫诱导机制与受体机制等机制。
6.禽腺病毒血清4型重组株的生物学特性分析
通过不同的生物学检测手段，探究病毒血清4型重组株在不同条件下的性状与差异。
四、参考文献
1.Guo,Z.S.,Pan,Q.,&Zhang,Y.(2014).IdentificationofanaturalrecombinantavianadenovirusisolatedfromduckfarmsinChina.Virusgenes,48(2),244-250.
2.Lu,R.,Zhou,J.,Wu,X.,Chen,Y.,Wan,H.,Zhao,Q.,&Chen,H.(2016).Developmentofanindirectenzyme-linkedimmunosorbentassayforthedetectionofantibodiesagainstthehexonproteinofduckadenovirustype1.AvianPathology,45(3),327-332.
3.Scott,P.C.,&Bové,J.M.(2008).Avianadenoviruses.Diseasesofpoultry,1,317-332.
4.Kellogg,J.D.,&Reedman,D.W.(1977).DNAreplicationincellsinfectedwithavianadenovirus.Journalofvirology,24(3),1012-1017.