犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因的原核表达的任务书.docx

犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因的原核表达的任务书
任务书
任务名称：犬细小病毒的分离鉴定及VP2基因的原核表达研究
任务背景：
犬细小病毒是引起犬瘟热、副伤寒和犬冠状病等感染性疾病的一种重要病原体。为了更好地了解犬细小病毒的基本特性及其感染机理，需要对其进行分离、鉴定和表达等研究。
任务目的：
本次任务旨在对犬细小病毒进行分离鉴定，并对其VP2基因进行原核表达，为深入研究犬细小病毒的相关生物学特性提供支持。
任务内容：
1.犬细小病毒的分离及鉴定
（1）收集本地区病死犬的血清样本，并对其进行病原体检测，筛选出疑似感染犬细小病毒的样本。
（2）采用感染性分离的方法，将疑似感染犬细小病毒的样本接种于犬肾细胞系中，进行分离。
（3）经过多次传代，筛选出纯化的犬细小病毒株，并进行电镜观察、PCR检测等方法进行鉴定。
2.VP2基因的克隆及原核表达
（1）从已经分离鉴定的犬细小病毒株中提取总RNA，并利用RT-PCR方法扩增出VP2基因的全长序列。
（2）将扩增得到的VP2基因克隆至原核表达载体pET28a(+)中，并进行DNA测序进行验证。
（3）将重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)细胞中，利用IPTG诱导表达VP2蛋白。
任务方案：
1.犬细小病毒的分离及鉴定
（1）血清样品的收集：在病死犬的尸检过程中，收集其血清样本，并进行病原体检测，挑选出疑似感染犬细小病毒的样本。
（2）病毒分离：将疑似感染犬细小病毒的样本接种于犬肾细胞系中，进行分离，并进行多次传代，筛选出纯化的病毒株。
（3）病毒鉴定：利用电镜观察、PCR检测等方法，对病毒株进行鉴定，并确定其为犬细小病毒。
2.VP2基因的克隆及原核表达
（1）VP2基因扩增：利用RT-PCR方法，从已分离的犬细小病毒株中扩增出VP2基因的全长序列。
（2）基因克隆：将VP2基因克隆至原核表达载体pET28a(+)中，进行DNA测序进行验证。
（3）原核表达：将重组质粒转化入大肠杆菌BL21(DE3)细胞中，利用IPTG诱导表达VP2蛋白。
任务计划：
任务开始时间：2022年1月1日
任务结束时间：2022年12月31日
任务进度：
1月1日-3月31日：收集犬细小病毒分离的样本，并进行病原体检测，筛选出疑似感染犬细小病毒的样本。建立犬肾细胞系，进行感染性分离，经过多次传代，筛选出纯化的犬细小病毒株。
4月1日-6月30日：对分离得到的犬细小病毒株进行电镜观察、PCR检测等方法进行鉴定，并确定其为犬细小病毒。设计VP2基因的引物，进行扩增。
7月1日-9月30日：将VP2基因克隆至原核表达载体pET28a(+)中，并进行DNA测序进行验证。建立菌株BL21(DE3)，进行重组质粒的转化。
10月1日-12月31日：利用IPTG诱导表达VP2蛋白，并进行蛋白的纯化与鉴定。
任务成果：
1.犬细小病毒的分离、鉴定报告
2.VP2基因克隆和原核表达报告
3.论文或研究报告一篇
4.相关数据或实验记录
任务经费：
本次任务的经费为50000元，用于购买实验材料和设备，人员工资和其他杂项开支。
任务风险：
1.实验过程中可能出现病原体外泄的风险，需要加强实验室安全管理。
2.病毒分离、鉴定和表达的实验难度较大，需要设备和技术的支持。
3.实验过程中可能出现数据失误或实验失败的情况，需要科学有效地进行数据管理和实验纠错。