雌激素调控人类WNK4基因表达的机制研究的任务书.docx

雌激素调控人类WNK4基因表达的机制研究的任务书
任务书
课题名称：雌激素调控人类WNK4基因表达的机制研究
研究背景：
WNK4是一种重要的离子通道蛋白，其在肾小管上皮细胞中调节钠离子通道的活性。WNK4的表达与肾小管功能密切相关，因此对于该基因的调控机制的研究具有重要的基础学术价值和临床应用意义。
研究目的：
本项目旨在明确雌激素对于WNK4基因表达的调控机制，进一步探索雌激素在肾小管功能中的作用，并提供相关临床指导意义。
研究内容：
1.构建WNK4基因启动子的重组载体，将其转移至肾上皮细胞中进行进一步研究。
2.通过构建分析WNK4基因的启动子区域上游有关雌激素响应元件的人工启动子，进行生物信息学分析，预测可能存在的相关转录因子和DNA结合蛋白，如ATF、SP1等。
3.通过RNAi技术抑制钠离子通道蛋白的表达水平，分析其对肾小管细胞功能的影响。
4.通过荧光免疫共沉淀技术检测WNK4基因启动子区域上游的转录因子与雌激素受体E2F之间的相互作用，阐明其调控机制。
5.建立肾小管上皮细胞的模型，验证雌激素对WNK4基因表达的调控及对肾小管功能的影响。
6.染色体免疫共沉淀技术分析雌激素对WNK4基因启动子的表达调控机制，并通过生物化学分离技术验证相关物质的存在。
预期成果：
1.确定并克隆WNK4基因启动子的关键响应元件区域，提供该区域的DNA结合蛋白序列信息。
2.阐明WNK4基因启动子上游雌激素响应元件与转录因子之间的相互作用及调控机理。
3.验证雌激素对钠离子通道蛋白表达的调控作用，分析其在肾小管功能中的作用。
4.建立肾小管上皮细胞模型，验证雌激素对WNK4基因表达的调控及对肾小管功能的影响。
5.发现进一步阐明WNK4基因的调控机制，为肾小管功能紊乱相关疾病的治疗研究提供新的理论依据。
研究方法：
1.将WNK4基因启动子区域克隆至pGL3基因荧光重组载体中，并进行转染及荧光共振能量转移实验，分析雌激素对其启动子的调控生物学效应。
2.通过ChIP-qPCR技术测定雌激素受体与WNK4基因启动子上游的响应元件区域的结合情况，提供基础数据信息。
3.制备小鼠单克隆抗体以及检测生物学功能，以评估小分子化合物在疾病治疗中的潜力。
4.制备acohosol数据以进行显微镜解析，以分析不同时间点在细胞形态、增殖等方面表现的变化，并进行生物信息学分析。
研究预算：
本项目预算500万元，用于购置实验所需物质、设备以及员工薪资等相关费用。
项目人员：
本项目由主要研究人员3人组成，实验员及技术支持人员各5人，项目负责人1人。拟采用全日制研究形式，分阶段进行。
研究周期：
本项目拟采用3年的研究周期，包括基础研究、临床应用方面的基础研究、临床试验等方面的内容。
参考文献：
1.XiongY,YangY,ChenL,etal.WNK4(710delG)MutationCausingFHHNCSyndromeinaChineseFamily[J].InternationalJournalofMedicalSciences,2012,9(8):1-6.
2.XieJ,WangY,KangT,etal.ElevatedSerumIL-8LevelCorrelateswithPoorPrognosisinNasopharyngealCarcinoma[J].JournalofCancerResearch&Therapy,2013,9(4):635-639.
3.HadchouelJ,EllisonDH,GambaG.RegulationofRenalElectrolyteTransportbyWNKandSPAK-OSR1Kinases[J].TrendsinEndocrinology&Metabolism,2014,25(12):617-626.
4.SáBorgesHB,GuimarãesJDS,AlvesDA,etal.WNK4andCPT1BExpressionasPreciseandSensitiveIndicatorsofRenal-CellCarcinomaIntratumoralHeterogeneity[J].ClinicalScience,2018:CS20180219.
5.GuoX,ZhaoM,HuangY,etal.DiscoveryandOptimizationofaSmall-MoleculeInhibitoroftheWNK1Kinase[J].Bioorganic&MedicinalChemistryLetters,2015,25(3):603-609.