COPD患者TLR-4表达与气道炎症及气道粘液高分泌的研究的任务书.docx

COPD患者TLR-4表达与气道炎症及气道粘液高分泌的研究的任务书
任务书
题目：COPD患者TLR-4表达与气道炎症及气道粘液高分泌的研究
一、研究背景和意义
慢性阻塞性肺疾病（COPD）是一种慢性进行性疾病，主要表现为慢性支气管炎和肺气肿，是导致全球人群死亡的常见疾病之一。COPD患者的气道、肺泡发生炎症反应，并出现气道高反应性和气道阻塞。CigarettesmokingisamajorfactorinthepathogenesisofCOPDandisresponsibleforover80%ofcases.烟草烟雾致病的分子机制正在逐渐揭示，然而烟草烟雾引发的气道炎症及气道粘液高分泌的分子机制尚未完全解析。Toll样受体4（TLR-4）是哺乳动物特有的十几种Toll样受体类家族之一，广泛分布于机体多种组织和细胞表面，是细菌内毒素（LPS）检测的重要受体，也是诱导炎症反应的重要分子。近年来的研究显示，COPD患者的气道上皮细胞、炎症细胞及间质细胞等组织细胞表达TLR-4增强，但研究结果并不一致，因此有必要开展本研究，探讨COPD患者TLR-4表达与气道炎症及气道粘液高分泌的相关性，从分子水平了解烟草烟雾引发COPD气道高反应性和气道阻塞的分子机制，为COPD的早期诊断和治疗提供新思路。
二、研究内容和实施方案
（一）研究内容
本研究主要包括以下内容：
1.收集COPD患者和正常对照组的支气管肺泡灌洗液，采用蛋白质检测方法检测TLR-4蛋白表达水平。
2.收集COPD患者和正常对照组的支气管肺泡灌洗液，采用实时荧光定量PCR（real-timePCR）检测TLR-4mRNA表达水平。
3.收集COPD患者和正常对照组的支气管肺泡灌洗液，采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测炎症因子（如IL-6、IL-8、TNF-α）以及黏蛋白蛋白（如MUC5AC）的含量。
4.统计分析以上实验数据，评价TLR-4表达与气道炎症及气道黏液高分泌的相关性。
（二）实施方案
1.对象筛选：收集2018年1月至2019年12月本院胸外科门诊的COPD患者，根据COPD世界卫生组织（WHO）定义（FEV1/FVC<70%，且预测值<80%），筛选符合诊断标准的COPD患者；同时收集正常对照组人群，年龄和性别与研究组相当。
2.样本采集及实验操作：对照组和COPD患者的支气管肺泡灌洗液样本采集，离心，取上清部分备用。检测TLR-4蛋白表达水平和mRNA表达水平采用Westernblot和实时荧光定量PCR（real-timePCR）方法；检测炎性因子和黏液蛋白采用酶联免疫吸附法（ELISA）。
3.数据处理及统计分析：对实验数据进行描述性统计和方差分析；采用Pearson相关和多元线性回归分析，评估TLR-4表达与气道炎症及气道黏液高分泌的相关性。
三、研究计划和时间安排
1.大致计划
2018年1月至2018年12月：搜集相关文献，熟悉实验操作流程
2019年1月至2019年6月：样本采集、实验操作及数据处理
2019年7月至2019年10月：数据分析及撰写论文
2.时间安排
（详见下表）
|时间|项目|目标|
|---|---|---|
|2018年1月至2018年12月|搜集文献|获取必要的研究知识|
|2019年1月至2020年6月|样本采集、实验操作及数据处理|完成实验数据的采集和处理|
|2019年7月至2019年10月|数据分析及撰写论文|分析实验数据，完成论文撰写|
|合计|-|完成研究任务|
四、研究经费支持
本研究经费总计为￥100000，主要包含以下项目：
1.实验操作费用：￥50000
2.文献搜集费用：￥10000
3.科研经费：￥30000
4.论文发表费用：￥10000
五、预期成果
1.完成TLR-4在COPD气道炎症及气道高黏液分泌中的表达情况研究，探讨其分子机制；
2.为COPD的早期诊断及治疗提供分子水平的新思路。