毒害艾美耳球虫配子体cDNA文库的构建与筛选及其动力蛋白基因的表达的任务书.docx

毒害艾美耳球虫配子体cDNA文库的构建与筛选及其动力蛋白基因的表达的任务书
任务题目：毒害艾美耳球虫配子体cDNA文库的构建与筛选及其动力蛋白基因的表达
任务目的：
本任务旨在构建毒害艾美耳球虫配子体cDNA文库，并通过筛选和表达，分离得到动力蛋白基因，以进一步深入了解毒害艾美耳球虫的生物学特征及其致病机理。
任务内容：
1.收集毒害艾美耳球虫配子体材料，并进行总RNA提取和纯化；
2.用反转录酶将（RT）总RNA转录为一链cDNA；
3.扩增cDNA得到双链cDNA，然后使用SizeSep400Chromatography根据大小分离cDNA，得到400-500bp左右的片段；
4.连接文库，将分离得到的cDNA片段连接到文库质粒载体上；
5.将文库转化到大肠杆菌（E.coli）DH5α中，得到毒害艾美耳球虫配子体cDNA文库；
6.选用差异筛选法，对文库进行筛选，筛选条件为利用抗毒害艾美耳球虫配子体抗体进行筛选，从而揭示毒害艾美耳球虫配子体的生物学特征；
7.提取筛选得到的cDNA，进行酶切和测序，得到序列信息；
8.通过基因克隆、表达、以及相应的生物学实验研究，鉴定筛选出的动力蛋白基因的生物学特性及其在毒害艾美耳球虫致病过程中的功能和作用。
任务步骤：
1.设计实验方案，制定操作流程；
2.收集毒害艾美耳球虫配子体样品；
3.进行总RNA提取和纯化；
4.将总RNA反转录为一链cDNA；
5.将一链cDNA进行PCR扩增，得到双链cDNA；
6.使用SizeSep400Chromatography根据大小分离cDNA片段；
7.连接文库，在文库质粒载体上接入cDNA片段；
8.将文库转化到大肠杆菌（E.coli）DH5α中，得到毒害艾美耳球虫配子体cDNA文库；
9.用抗毒害艾美耳球虫配子体抗体对文库进行筛选；
10.提取筛选得到的cDNA片段，进行测序；
11.筛选出动力蛋白基因并进行克隆和表达实验；
12.对动力蛋白基因进行生物学特性和功能及其在毒害艾美耳球虫致病过程中的作用进行研究。
任务成果：
1.毒害艾美耳球虫配子体cDNA文库的构建；
2.通过抗毒害艾美耳球虫配子体抗体筛选得到的cDNA的序列信息；
3.分离和鉴定出动力蛋白基因的生物学特性及其在毒害艾美耳球虫致病过程中的功能和作用。
任务周期：
本次任务预计周期为3个月。其中，第一个月主要是对毒害艾美耳球虫配子体样品进行总RNA提取和纯化，以及将总RNA反转录为一链cDNA；第二个月则是将一链cDNA进行PCR扩增，得到双链cDNA并进行大小筛选，筛选得到的cDNA片段连接到文库质粒载体上；第三个月则对文库进行抗毒害艾美耳球虫配子体抗体筛选，分离筛选得到的cDNA并进行酶切及测序，同时对动力蛋白基因进行克隆、表达，并进行生物学特性和功能研究。
任务风险：
1.寻找毒害艾美耳球虫配子体样品的难度。如果样品难以获得，将会影响任务的进展。
2.文库构建过程中的质量控制。文库的构建是一个重要的环节，如果文库质量不好，将会影响整个任务的进行。
3.文库筛选的准确性。筛选过程中可能会出现假阳性或假阴性的情况，需要采用多种筛选方法进行筛选，以提高筛选的准确性和可靠性。