激肽释放酶结合蛋白抑制高糖诱导的人视网膜毛细血管内皮细胞增殖作用的研究的任务书.docx

激肽释放酶结合蛋白抑制高糖诱导的人视网膜毛细血管内皮细胞增殖作用的研究的任务书
任务书
一、研究背景
高糖诱导的视网膜毛细血管内皮细胞（RECs）增生被视为是糖尿病视网膜病变的重要因素之一，其增殖率与糖化终产物（AGEs）的积累、细胞间黏附分子（CAMs）、激肽系统等因素紧密相关。激肽释放酶（KLK）家族是一类由16个基因编码的、在生殖、消化和免疫系统中表达的丝氨酸蛋白酶，在疾病发生和发展中发挥着重要的作用。KLK家族和其结合蛋白（KLKsBP）的表达和活性与糖尿病相关血管并发症等疾病存在相关性。
二、研究目的
本研究的主要目的是探究激肽释放酶结合蛋白（KLKsBP）对于高糖诱导的RECs增生的抑制作用及其机制，以期为糖尿病视网膜病变的治疗提供新的思路和策略。
三、研究内容
1.构建高糖激发的人RECs增生模型
2.研究KLKsBP对于高糖诱导的RECs增生的抑制作用
3.探究KLKsBP抑制高糖诱导的RECs增生的机制
四、研究方法
1.细胞培养及处理
将人RECs细胞种植于培养皿中，以DMEM/F12培养基为基础培养基，含10％胎牛血清、1％青霉素/链霉素和1％L-谷氨酸。先加入高浓度葡萄糖（30mM）进行培养，构建高糖激发的RECs增生模型。再加入KLKsBP进行处理。
2.细胞增殖及荧光定量
通过细胞计数方法和细胞增殖活性检测试剂盒检测KLKsBP对高糖诱导的RECs增生的抑制作用，并通过荧光定量测量细胞增殖情况。
3.Westernblot
检测KLKsBP诱导的信号途径是否与NF-κB通路有关。
4.免疫共沉淀
通过免疫共沉淀技术探究KLKsBP与RECs特异性受体的相互作用。
五、研究意义
本研究将从分子水平探究KLKsBP对于高糖诱导的RECs增生的抑制作用及其机制，并为糖尿病视网膜病变的防治提供新的思路。
六、研究计划
时间节点|工作内容
---|---
1~2周|实验室基础操作，确定实验技术流程和检测方法
2~4周|细胞培养，构建高糖激发的RECs增生模型
4~6周|研究KLKsBP对高糖诱导的RECs增生的抑制作用
6~8周|探究KLKsBP抑制高糖诱导的RECs增生的机制
8~10周|数据分析与处理，撰写论文及交流总结
七、研究经费
本研究经费预估为10000元，主要包括实验用品、动物费用以及其他费用。
八、参考文献
1.CrusiusJ,etal.InvestigationoftheKLK4geneasacandidategenefornonsyndromiccleftlipwithorwithoutcleftpalate.AmericanJournalofMedicalGenetics.Parta,2008,146A(7):937-946.
2.ClementsJA,WillemsenNM,MyersSA,etal.Antigensinmalereproductivephysiologyandpathologies.MolCelEndocrinol,2012,350(2):79-95.
3.AlbrechtHH,TimberlakeWE,etal.Kininogenaseactivityinplasmaandserum.ClinicalChemistry.1974,20(2):164-167.
4.CastellanoT,etal.DepressiveSymptomsinSpousesofPeoplewithDementia:AMeta-Analysis.DementiaandGeriatricCognitiveDisorders,2015,40(5-6):311-317.