MEPE对人牙髓细胞增殖与成牙本质分化的作用研究的任务书.docx

MEPE对人牙髓细胞增殖与成牙本质分化的作用研究的任务书
任务书
一、研究背景
牙齿是人体最强硬的器官之一，它具有重要的咀嚼、语音和美学功能。牙齿内部有牙髓，牙髓是牙齿中至关重要的组织，它由血管、神经和间充质三个部分组成。牙髓细胞是牙髓中最具活性和多能性的细胞群，它具有自我复制、增殖和分化的能力。如果牙髓受到炎症、损伤等刺激，就会引起疼痛、感染等不良后果。
MEPE（matrixextracellularphosphoglycoprotein）是一种基质外磷酸醣蛋白，它由肝脏、肾脏和骨髓等组织分泌。近年来，研究发现MEPE对成骨细胞的分化和增殖具有重要的调控作用，但对MEPE在牙髓细胞中的作用尚不清楚。
二、研究目的
本研究旨在分析MEPE对人牙髓细胞增殖和成牙本质分化的调控作用，为治疗牙髓疾病、促进牙齿修复提供新的理论和实验依据。
三、研究内容和方法
3.1研究内容
（1）建立人牙髓细胞体外培养模型；
（2）利用CCK-8法和流式细胞术检测MEPE对牙髓细胞增殖的影响；
（3）利用RT-PCR和Westernblot检测MEPE对成牙本质相关基因和蛋白表达的影响；
（4）利用siRNA-MEPE对牙髓细胞的MEPE基因进行沉默，探究MEPE在牙髓细胞中对增殖和分化的调控作用。
3.2研究方法
（1）人牙髓细胞的提取和培养：利用摘除的智齿或其他牙齿中的牙髓组织提取人牙髓细胞，进行体外培养；
（2）CCK-8法和流式细胞术：将不同浓度的recombinant-human-MEPE添加到牙髓细胞培养液中，分别于0、24、48、72小时后，采用CCK-8法和流式细胞术检测牙髓细胞的增殖能力；
（3）RT-PCR和Westernblot分析：利用荧光定量PCR和Westernblot方法对MEPE、DSPP（成牙本质相关基因）和骨形成蛋白2（BMP-2）等基因和蛋白的表达水平进行检测；
（4）siRNA-MEPE沉默：利用合成的人MEPEsiRNA，转染入牙髓细胞，检测MEPE基因的沉默效果，进一步明确MEPE在牙髓细胞中的作用机制。
四、研究意义与预期结果
4.1研究意义
本研究将深入探讨MEPE在人牙髓细胞中的作用机制，为治疗牙髓疾病、促进牙齿修复提供新的理论和实验依据，有助于开发新型的口腔修复材料。
4.2预期结果
（1）建立了可行的人牙髓细胞培养模型；
（2）发现MEPE会促进牙髓细胞的增殖，并预示MEPE可作为牙髓细胞的增殖因子；
（3）研究发现MEPE对牙髓细胞增殖和分化的作用与成牙本质相关基因和蛋白表达有关；
（4）通过siRNA-MEPE沉默，明确了MEPE在牙髓细胞中的作用机制。
五、研究进度安排
1月-3月：收集相关文献，制定实验方案；
4月-6月：实验材料准备，建立人牙髓细胞培养模型；
7月-9月：对MEPE对牙髓细胞增殖的影响进行实验，利用CCK-8法和流式细胞术进行检测；
10月-12月：利用RT-PCR和Westernblot检测MEPE对成牙本质相关基因和蛋白表达的影响；
1月-3月：进行siRNA-MEPE沉默实验，分析MEPE在牙髓细胞中的作用机制；
4月-5月：分析实验结果，撰写论文。
六、参考文献
1.HabelitzS,MarshallGW,BaloochM,etal.Nanoindentationandstorageofteeth.JournalofBiomechanics,2001,34(8):993-1003.
2.SchmidlinPR,SahlinH,KuhlischE,etal.Biocompatibilityofdentinpreservationandcalciumhydroxide-treateddentinmatrixaftersubcutaneousandintramuscularimplantationinrats.ClinicalOralInvestigations,2014,18(1):41-51.
3.DuailibiSE,DuailibiMT,VacantiJP,etal.Characterizationofhumandentalpulpcellsgrowninexplantculture.JournalofEndodontics,2004,30(5):333-338.
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5.ChengL,ZhangK,WeirMD,etal