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抗肿瘤药物顺铂与ATPase的作用机理研究的开题报告
一、毕业设计选题的背景和意义
癌症是一种常见疾病，其发病率逐年递增。现代医学中，采用药物疗法来治疗肿瘤已成为常见的治疗方法之一。顺铂是目前临床常用的抗肿瘤药物之一，其主要作用机理是通过与DNA结合，在肿瘤细胞内形成DNA加合物，从而干扰DNA的复制和转录过程，并最终导致肿瘤细胞凋亡。顺铂具有广谱性、强效性和强化疗效果等优点，然而，其严重毒副作用也不容忽视，如肾损伤、神经系统损害等。
ATPase是一种可以水解ATP并释放能量的酶，其在生理和病理生理过程中具有重要的作用。近年来，有研究表明，顺铂可以影响细胞膜上Na+/K+-ATPase的功能，从而导致神经肌肉功能的受损。然而，关于顺铂与其他类型ATPase的作用机理仍不明确，这也是本研究的研究对象。
二、研究目的
本研究的目的主要是探究顺铂与ATPase的作用机理，包括其对ATPase活性的影响以及对ATPase在细胞内的分布及表达的影响。通过研究顺铂对ATPase的作用机理，可以进一步探究顺铂的药理学作用及其毒副作用，为临床用药和科学研究提供理论依据。
三、研究内容与方法
（一）研究内容
本研究将分别采用体外实验和体内实验，探究顺铂与ATPase的作用机理。
1.体外实验：体外实验主要是通过测定顺铂对ATPase活性的影响，以探究顺铂对ATPase的直接作用。实验包括以下步骤：
（1）制备ATPase酶
从不同组织中，如肝脏、心脏、肾脏等，分别制备ATPase酶的提取液。
（2）测定ATPase活性
测定不同组织提取液中的ATPase活性，并分别加入不同浓度的顺铂来观察其对ATPase活性的影响。
2.体内实验：通过动物实验来观察顺铂对ATPase在体内的作用。实验包括以下步骤：
（1）动物注射顺铂
将小鼠分为两组，一组给予顺铂注射，另一组作为对照组。
（2）测定ATPase活性
在顺铂注射后24小时和48小时，测定小鼠肝脏中的ATPase活性。
（3）Westernblot分析
通过Westernblot分析，观察顺铂对ATPase在小鼠肝脏中表达的影响。
（二）研究方法
1、制备ATPase酶的提取液
取不同组织样本，如心脏、肝脏、肾脏等，分别用PBS液均质，离心后取上清液，即为ATPase酶的提取液。
2、测定ATPase活性
步骤如下：
（1）制备ATPase酶的反应体系
ATPase酶提取液5μl，Tris缓冲液200μl，NaCl200μl，ATP2+4μl。
（2）不同浓度顺铂加入ATPase酶反应体系中
在上述反应体系中加入不同浓度的顺铂溶液。
（3）测定ATPase活性
在37℃恒温摇床上进行反应30min，加入酚酞指示剂后，根据其吸光度的变化，测定ATP酶中ATP的水解量。
3、动物实验
步骤如下：
（1）动物注射顺铂
将小鼠分为两组，一组注射顺铂，另一组注射等浓度的生理盐水。
（2）测定ATPase活性
在顺铂注射后24小时和48小时，测定小鼠肝脏中的ATPase活性。
（3）西方印迹分析
将小鼠肝脏的ATPase进行电泳分离，转移至PVDF膜上后，进行Westernblot分析，观察ATPase在顺铂注射后在小鼠肝脏中的表达情况。
四、预期结果和意义
通过本研究的实验，我们预期得到如下结果：
1、采用体外实验得到顺铂对ATPase的直接作用，通过测定ATPase酶的活性，可以得到不同浓度顺铂对ATP酶的直接抑制作用。
2、采用体内实验得到顺铂在小鼠肝脏中的作用，通过测定ATPase的活性和Westernblot分析获得顺铂对ATPase在体内表达的影响。其中，测定顺铂注射后24小时和48小时小鼠肝脏中ATPase活性时，预计可以观察到顺铂注射后小鼠肝脏中的ATP酶活性降低，即在体内顺铂可以抑制ATP酶的活性。
通过研究顺铂与ATPase作用机理，可以揭示顺铂的药理作用和毒副作用，为临床用药和科学研究提供理论依据。